细胞的迁移性-趋化性和侵袭性检测方法.pdf

细胞的迁移性，趋化性和侵袭性检测方法 简介 细胞的迁移性，一般来说是指细胞受到外来信号的刺激，由一个地方迁移到了另一个地方的特性， 通常发生在比如伤口愈合，细胞分化，胚胎发育和肿瘤转移的过程中。细胞的侵袭性和迁移性相 似，但不同的是，发生侵袭时，细胞需要降解一层胞外基质ECM或者基底膜基质BME进而迁移到一 个新的地方。当正常细胞发生炎症反应，或者肿瘤细胞发生转移时都需要细胞的侵袭性。由此可 见，了解这些特性的发生机制，对整个生物学研究有着重要而深远的意义。 由康宁公司研发的transwell培养耗材的出现，为在体外研究细胞的趋化性和侵袭性提供了一个相对 简便的方法。通常的侵袭检测系统是由胶原蛋白，纤连蛋白，层粘连蛋白等复杂的胞外基质和基底 膜基质组成。还有更复杂的检测手段是在前面所提到的复合蛋白层膜上培养单层表皮细胞。将分泌 多种生长因子的细胞培养在可渗透层膜上作为趋化源的系统也可以用于趋化性检测或者更繁杂的侵 袭性检测。 下面所述的方法步骤是基于BME层膜的细胞侵袭性检测，附以趋化性检测为例(对于不含 BMC和 ECM层膜的侵袭性检测也遵循类似的方法)。这里具体列出了以康宁96孔transwell耗材为例的实验 参数。对于不同规格大小的系统可以根据下面表格中的数据调整材料或试剂的用量。 实验材料 实验细胞系 非侵袭性MCF-7细胞系(人类乳腺癌细胞，ATCC No. HTB-22) 侵袭性HT1080细胞系(人类纤维肉瘤细胞，ATCC No. CCL-121) 检测平板类型 8微米孔径的96孔HTS transwell 培养系统 (康宁 Cat. No. 3374) 96孔黑板 (康宁 Cat. No. 3583) 96孔黑色实心微型板 (康宁 Cat. No. 3916) 8微米孔径的6孔transwell培养系统 (康宁 Cat. No. 3428) 12微米孔径的12孔transwell培养系统 (康宁 Cat. No. 3403) 8微米孔径的24孔transwell培养系统 (康宁 Cat. No. 3422) Hilary Sherman, Pilar 超低粘附6孔和24孔平板 (康宁 Cat. No. 3471 3473) Pardo and Todd Upton 试剂 Corning Life Sciences 5×基底膜提取物 (BME)包被溶液 (Trevigen Cat. No. 3455-096-02) 900 Chelmsford Street 10×包被缓冲液 (Trevigen Cat. No. 3455-096-03) Lowell, MA 01851 10×细胞裂解液 (Trevigen Cat. No. 3455-096-03) 此溶液用于配制裂解液而不能用来消化收集细胞 HyQta