第十三单倍体诱导和育种细胞工程PPT.ppt

第十三章 单倍体诱导和育种;主要内容 植物小孢子发育过程 花粉和花药培养条件 花粉和花药培养方法 单倍体诱导的应用;植物单倍体的概念和来源;单倍体的主要类型 具有来自二倍体染色体数目一半的单倍体（也称一倍体）和具有来自多倍体种染色体数目一半的多倍单倍体。 单倍体的一般概念是适用于起源于孢子体发生和含有一半染色体的任何植物。;;;药隔：花药中部，由薄壁细胞构成，内有维管束;花粉母细胞到成熟花粉粒过程 1）四分体孢子时期：（第一期） 花粉母细胞 减数分裂 四分体（未成熟的花粉粒、小孢子，n） ;2）单核期（第二期） 四分体后，小孢子分开，中央有核 液泡增大，液泡将花粉粒挤向一边 单核早期：细胞小，核大，无液泡，居中， 单核中期：细胞大，核大，有液泡，居中， 单核晚期：液泡增大，核靠边（单核靠边期） ;;四分体时期;精子;1花粉母细胞;花粉粒类型;第二节 花药和花粉培养;（一）再生方式;花药再生植株的方式;;（三）材料的消毒;2、消毒液处理;在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药;①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 ;在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是营养核和生殖核融合造成的） ;;花药培养的优缺点;二 花粉培养;花粉培养的优点：;花粉培养的缺点;（二）裸子植物的花粉培养;;（三） 被子植物的花粉培养;看护培养法;;植板培养法;;;花药材料的选取 关键选取处于合适发育期的花粉，离体培养后才能启动花粉发育。实践表明，从减数分裂期至双核期的花粉，均有可能诱导离体孤雄发育。 大多数园艺植物的花粉培养，成功率最高的时期为单核期，或单核中晚期。;花粉培养;;;;（四）小孢子母细胞培养;;第三节 花药和花粉的培养方法;;1.遗传差异;;2.母本的生理状态;3.花粉的发育时期;小孢子发育时期：单核早期 单核居中期 单核靠边期 双核期 三核期 1.小孢子不同发育时期对胚状体和愈伤组织诱导率不同。 2.不同植物种类，诱导胚状体发生和愈伤组织形成，均有其适宜的小孢子发育期 ;;; 花药在接种以前一般需先用醋酸洋红染色压片镜检，以确定花粉的发育时期，并找出花粉的发育时期与花蕾或幼穗大小、颜色等形态学性状的相关性，便于取材。 外观依据 花蕾未开放；花蕾长度。 ; 在水稻中，以单核靠边期的花粉对诱导单倍体植株较为适宜，在外部形态上可根据叶枕距为5-15cm，颖片淡黄绿色、雄蕊长度接近颖片长度的1/2这些条件鉴定。;二、材料的预处理;;1.低温处理;低温预处理可以提高花粉胚的诱导。 各种植物要求预处理的温度和时间不同。 以1-5℃预低温处理小麦幼穗，能提高花粉愈伤组织的产量。在4℃下冷冻石刁柏花蕾，预处理4天、8天和12天，愈伤组织诱导率比室温对照分别提高2.4倍、1.9和1.5倍。 ; 关于低温的作用机理，不同的研究者提出了不同的解释。 （1）低温条件下改变了小孢子第一次有丝分裂的轴向，从而促使小孢子发育启动 （2）冷处理的作用，在于其能够使绝大多数花粉保持存活并完成诱导过程。但总的看来，其结果多数是小孢子改变原来的发育方向，而转向胚胎发生和孢子体发育;2.高温处理;3.离心处理;4.激光照射;5.乙烯利处理;6.甘露醇处理;三、培养基;（一）基本培养基;;;（2）激素;（3）附加成分;（二）条件培养基;四、接种和再生植株培育;;2.培养条件（温度和光照）;3.花粉植株的培育;;;;;总 结;4.单倍体的鉴定;（2）鉴定方法;;;;;;5.单倍体植物的染色体加倍;（2）单倍体植物的染色体加倍方法;方法－化学诱变; 单倍体植株，一旦加倍成功就是一株纯合二倍体，可以正常开花结实，繁殖后代。这样的材料可直接试管繁殖应用于生产，或者作为常规育种的原始材料。;花粉培养及单倍体应用存在的问题;植物组织培养技术与花药花粉培养技术的异同点;第四节 单倍体在植物育种中的应用; 单倍体育种的优越性 单倍性植物不能结籽，生长势弱，没有单独的利用价值，但其经染色体加倍后成为纯合的双二倍体，因此可缩短育种年限，加快育种进程，在杂交育种、诱变育种、远缘杂交及杂种优势的利用等多方面具有重要意义。;1.控制杂种分离缩短育种周期;大大缩短育种周期。;2. 排除显隐性基因干扰，提高选择效率;3. 单倍体是诱变育种的良好材料;;4.单倍体在远缘杂交中的利用; 通过花粉培养，则可以克服远缘杂种的不育性和杂种后代呈现的复杂分离现象。因为尽管远缘杂种存在不育性，但并不是绝对不育，仍有少数或极少数花粉具有生活力。这样就可通过对这些可??性