抗甲胎蛋白单链抗体在大肠杆菌中表达条件的优化及活性鉴定.pdfVIP

学 报 ４６０ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１２，４３（５）：４６０－４６５ 抗甲胎蛋白单链抗体在大肠杆菌中表达条件的优化及 活性鉴定 吕海丽，姬晓南，冯丽亚，张　瑜，高向东 （中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９） 摘　要　将抗甲胎蛋白单链抗体（ｓｃＦｖＡＦＰ）基因克隆至载体ｐＥＴ３２ａ，转入大肠杆菌ＥｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３），在不同的诱 导剂浓度、诱导温度和时间下诱导ｐＥＴ３２ａｓｃＦｖＡＦＰ表达，ＳＤＳＰＡＧＥ分析表明３７℃培养４ｈ时加入０４ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基 β Ｄ硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导５ｈ为最适表达条件，目的蛋白表达量约为总蛋白的５０％，其产物以包涵体形式存在。利用稀 释法和透析法对包涵体复性，复性率为３７３８％，活性蛋白产量达到２００ｍｇ／Ｌ。竞争抑制ＥＬＩＳＡ法初步鉴定活性，当ｓｃＦｖ ＡＦＰ与亲本单抗浓度比为１６∶１，竞争ＥＬＩＳＡ抑制率达到５４１３％，说明ｓｃＦｖＡＦＰ具有较好的抗原结合特异性。该研究为 ｓｃＦｖＡＦＰ的获得与抗体的进一步应用改造奠定了基础。 关键词　甲胎蛋白；单链抗体；表达；ＥｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）；ｐＥＴ３２ａ 中图分类号　Ｑ７８６　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１２）０５－０４６０－０６ ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｓｃＦｖＡＦＰａｎｄｉｔｓｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ  ＬＨａｉｌｉ牞ＪＩＸｉａｏｎａｎ牞ＦＥＮＧＬｉｙａ牞ＺＨＡＮＧＹｕ牞ＧＡＯＸｉａｎｇｄｏｎｇ ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅｆｒａｇｍｅｎｔｏｆａｌｐｈａｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ牗ｓｃＦｖＡＦＰ牘ｇｅｎｅｗａｓｓｕｂｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｖｅｃｔｏｒ ｐＥＴ３２ａａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥｃｏｌｉＢＬ２１牗ＤＥ３牘ｈｏｓｔ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｃＦｖＡＦＰｗａｓｉｍｐｒｏｖｅｄｂｙｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｂｙｃｈａｎｇｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｄｕｃｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ牞ｔｉｍｅａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＩＰＴＧＴｈｅｎｔｈｅ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｙｗａｓｄｅｎａｔｕｒｅｄａｎｄｒｅｎａｔｕｒｅｄ牞ｔｈｅｒｅｆｏｌｄｉｎｇｙｉｅｌｄｏｆｐｒｏｔｅｉｎｆｒｏｍｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｙｉｓａｂｏｕｔ３７３８％． ＴｈｅｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｒｅｎａｔｕｒｅｄｐｒｏｔｅｉｎ牞ａｎｄｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅｒｅａｃｈｅｄ５４１３％ｗｈｉｌｅｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒａｔｉｏｏｆｓｃＦｖａｎｄｐａｒｅｎｔｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｗａｓ１６∶１． ＴｈｉｓｗｏｒｋｗｏｕｌｄｂｅｈｅｌｐｆｕｌｆｏｒｔｈｅｆｕｒｔｈｅｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｃＦｖＡＦＰ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ａｌｐｈａｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ牷ｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅｆｒａｇｍｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙ牷ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ牷ＥｃｏｌｉＢＬ２１牗ＤＥ３牘牷ｐＥＴ３２ａ ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＱｉｎｇＬａｎＰｒｏｊｅｃｔｏｆＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ牗２０１０牘 　　单链抗体（ｓｃＦｖ）是近年来备受关注的一种小 中本实验室已经通过杂交瘤技术筛选出分泌抗 分子基因工程抗体，由