模块1-2：超声波提取香菇多糖.ppt

模块1-2 超声波提取香菇多糖 提取情景 视野 拓展 视野 拓展 超声波提取技术 超声波提取技术是近年来应用到中草药有效成份提取分离的一种最新的较为成熟的手段 提取情景 超声波提取技术 超声波在溶剂和样品之间产生声波空化作用，使固体样品分散，增大样品与萃取溶剂之间的接触面积，提高目标物从固相转移到液相的传质速率。 提取情景 超声波提取的原理 超声波在物质介质中的相互作用效应可分为热效应、空化效应和机械传质效应。超声波的热效应、机械传质作用及空化作用成为超声技术在提取应用中的三大理论依据。 1 超声波的热 效 应 2 超声波的机械 效 应 3 超声波的空化 效 应 提取情景 超声波提取的特点 适用于中药材有效成份的萃取，彻底改变传统的水煮醇提萃取方法的新方法，与常规提取工艺相比，超声波提取具有如下突出特点： 无需高温，超声波在40～70oC工作效率非常高，而温度在65oC度内天然产物有效成份基本没有受到破坏。 萃取效率高，超声波强化萃取20～40分钟即可获最佳提取率，萃取时间仅为传统方法的1/3或更少。提取3次，基本上可提取有效 成份的90%以上。 常压萃取，安全性好，操作简单易行，维护保养方便具有广谱性。适用性广，绝大多数的中药材各类成份均可超声萃取。 提取情景 真菌多糖生产技术 多糖的种类繁多，不同种多糖其提取分离方法各不相同。 一般按多糖的性质采取热水提取法、中性盐溶液提取法、碱提取法、水解酶消化提取法，蛋白酶水解法，近年来兴起超声提取研究热点。 生产订单：香菇多糖500kg，产品规格：LNT10%，水分9%，灰分4%，国标检测；价格：￥400元/Kg。 提取情景 三、超声波法提取香菇多糖 材料准备 操作流程 记录要点 超声波法提取香菇多糖 关键技术 教师讲解 提取情景 材料准备 干香菇，蒸馏水； 电热恒温鼓风干燥箱 组织粉碎机 圆底烧瓶，铁架台，温度计 超声波发生器（带加热功能） 真空泵，漏斗，滤纸，滤布，烧杯，量筒，玻璃棒等 提取情景 操作流程 香菇预先烘干→称取干香菇15克→粉碎→圆底烧瓶→200ml热水70℃→超声波发生器（水预热在60℃左右）→提取45min（中间停顿2次，每次5min）→过滤→滤渣→等滤液体积热水70℃→提取30min（中间超声波停2次，每次5min）→过滤→合并滤液→抽滤→滤液→量体积标识贮藏备用 提取情景 提取情景 多糖提取液中蛋白质的脱去方法 天然多糖提取后，往往提取液中含有大量杂物，其中蛋白质所占份额较大，必须首先去除，常用方法有Sevag法、三氯乙酸法、氯化钠法、氯化钙法、盐酸法、木瓜蛋白酶法以及两种方法之间的联合方法。实验研究时常以糖保留率和蛋白去除率为观测指标，各种参数因糖的来源不同需要适当调整。 教师讲解 提取情景 Sevag法 1 利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点，向香菇多糖浓缩液中加入其体积1/4的氯仿和 1/20的正丁醇，在分液漏斗中振荡20min，静置分层，将下层的氯仿和正丁醇放出，取上清液重复以上操作2次，得脱蛋白多糖液。 三氯乙酸法 2 多糖溶液加入1/5体积10％的三氯乙酸溶液，磁力搅拌30min，离心去除沉淀物，用3倍体积的95％的乙醇沉淀，5000r/min离心15min，沉淀加原来多糖溶液体积的1/5水溶解，加入1/5体积 10％三氯乙酸溶液，重复处理 3次，得脱蛋白多糖液。 提取情景 鞣酸沉淀法 3 在微沸状态下，向多糖溶液中滴加1％的鞣酸溶液，直至无沉淀产生，5 000r/min离心15min，离心取上清液，再滴加 1％的鞣酸溶液，直至无沉淀产生为止。 离心取上清液，透析，浓缩，得脱蛋白多糖液 。 盐酸法 4 多糖溶液用2 mol/L盐酸调节其pH=3，放置过夜，在5000 r/min条件下离心15 min，弃去沉淀，得脱蛋白多糖液。 氯化钠法 5 在沸腾状态下，将多糖浓缩液的pH值调至9～10，加入氯化钠使浓度达5% (w/v)，搅拌，煮沸30min，冷却至室温，过滤，得脱蛋白多糖液。 提取情景 低温酸碱法 6 将多糖水浸提液的温度降至4℃，然后加入有机酸，调整料液的酸碱度pH值为3.5-4.6，混均，再此4℃温度下作用1.5小时，5 000r/min离心15min，离心取上清液，再用NaOH调整pH值为7.0，再将料液浓缩，得脱蛋白多糖液。 木瓜蛋白酶法 7 取10mg/mL多糖溶液100mL，加入 0.01g木瓜蛋白酶，在 pH6.4条件下，于 60℃酶解 2h，沸水浴5min灭酶，冷却后，5 000r/min离心去变性酶沉淀。滤液浓缩至33mL左右，加 95%乙醇100mL，