粗毛栓菌漆酶的酶谱分析1 [答辩相关表格].doc

XXX 本科毕业设计(论文)答辩表 论文题目： 粗毛栓菌漆酶的酶谱分析 生命科学系 系 生物工程 专业 06级本科一班 学 号 XXX 姓 名 XXX 指导教师 XXX 评阅成绩 答辩委员会主席 答辩委员会委员 答辩成绩 XXX教务处印制 2010 年6 月 2 日 XXX本科毕业设计（论文）答辩记录表 答辩时间：2010年 6 月 2 日 记录人签字： 问1：为什么在你的研究中5%的凝胶不如7.5%的效果好 答： 本实验在采用圆盘电泳时，浓度为5%的胶液在玻璃管中不易聚合，其原因尚待分析。改用7.5的胶后，聚合效果较好。在7.5%的凝胶中显示4条带，说明着4中漆酶的同工酶等电点差异较大 问2：等电聚焦中有哪些因素影响漆酶酶谱的分辨率？ 答： 1、两性电解质的pH范围 因为两性电解质pH范围类型不同，有广谱和窄谱之分，窄谱pH范围相对较小，分辨率相对较高，广谱pH范围较大，误差也很大故分辨率较小。一般先用广谱两性电解质做IEF分析确定同工酶等电点区间然后再改用窄谱两性电解质，进一步测定各同工酶的等电点。 2、电泳方式 使用的是圆盘电泳还是平板电泳，现在市场上有预制胶出售，其型号种类多样客户可根据需要选购。 3、玻璃管长度 玻璃管较长则容易区分pI相近的蛋白质，使分辨率提高。 4、凝胶的浓度 浓度太大会则胶颗粒间隙小则阻力大影响蛋白样品的迁移，浓度太小凝胶不易聚合。 论文答辩评语： 该生介绍了论文的主要目的、内容与结果，能够正确回答有关提问。该生具备了一定的独立从事科学研究的能力。该论文达到了学士学位论文的要求。 答辩委员会主席签名： XXX本科生毕业设计开题报告 毕业论文题目 粗毛栓菌漆酶的酶谱分析 题目类型 实验 题目来源 指导教师拟定 院（系） 生命科学系 专 业 生物工程 指导教师 XXX 职 称 教授 姓 名 XXX 年 级 06级 学 号 XXX 一、立题依据(国内外研究进展或选题背景、研究意义等) 漆酶(Laccases)是一种结合多个铜离子的蛋白质蓝色，，属于铜蓝氧化酶借助氧将对苯二酚（氢醌）氧化成对苯醌的酚氧化酶的一种存在菇、菌及植物中也分布于微物、菌类中漆酶独特的催化特性使其在生物检测中有广泛的应用,作为高效的生物检测器而成为底物、辅酶、抑制剂等成分分析的有效工具和手段。漆酶可存活于空气中，发生反映后唯一的产物就是水，因此本质上是一种环保型酵素。由于这几年环保意识逐渐被人所重视，因此近年来漆酶也成为众多学者的研究对象。Trametes gallica是一种能分泌木质素过氧化物酶(Lignin peroxidase，LiP)、锰过氧化物酶(Manganese peroxidase，MnP)和漆酶(Laccase)三种重要木质素降解酶的白腐真菌，具有较好的木质素降解能力。, 并对性质进行探讨, 以便为木质素的降解的研究提供一定的科学依据, 同时为在造纸工业和环保工业上的应用提供一定的理论依据。 3、获得粗毛栓菌同工酶的酶谱。 三、研究方案（思路） 1、产酶培养基的制备。 2、浸提漆酶。 3、对提取的粗酶进行超滤浓缩。 4、对粗菌液盐析、除去盐离子。 5、透析：除去其他大分子物质。 6、离子交换柱层析：收集有酶活力的部分。 7、测定收集的酶的活力。 8、电泳。 四、论文进度安排 1、3月25日，产酶培养基的制备。 2、4月26日，粗酶液的浸提。 3、4月27日，对粗酶液的超滤浓缩。 4、4月29日，盐析。 5、4月30日，透析。 6、5月1日，离子交换柱对漆酶的柱层析。 7、5月4日，漆酶活性测定。 8、5月6日，电泳。 五、主要参考文献 [1] XXX. 2002．粗毛栓菌降解麦草木质纤维素的实验研究．四川大学博士学位论文. 2] XXX，任少亭，毕瑞明．2002．粗毛栓菌降解麦草木质纤维素的实验研究．微生物学杂志．3]王剑锋.2006.真菌漆酶高产菌株的筛选、发酵及其酶学性质研究. 西北大学 4]郭梅，蒲军，路福平，杜连祥. 2004（03）白腐菌漆酶特性及其应用前景.天津农学院学报 5] 张承圭，王传怀，袁玉荪，王新昌. 1991. 生物化学仪器分析及技术. 6] 北京大学生物系生物化学教研室. 1991. 生物化学实验指导. 7] 王秀奇，秦淑媛，高天慧，颜卉君. 1999. 基础生物化学实验（第二版） 8] 卢圣栋主编，现代分