酶法检测血清总胆固醇.docVIP

精品论文 参考文献 酶法检测血清总胆固醇 欧文华 (辽宁省朝阳市中心医院 辽宁朝阳 122000) 【中图分类号】 【文献标识码】 【文章编号】1672-5085 (2010)11-0070-02 【关键词】 酶法 总胆固醇 酶法检测血清总胆固醇是目前公认为最适于作血清总胆固醇测定的常规方法 [1] ，在各大中小医院实验室测定TC大多采用酶法，既可于作终点法手工操作，分光光度计比色测定，也可于半自动、全自动生化分析仪检测。它具有试剂单一、试验稳定、使用方便等优点。现报告如下。 1 原理 血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Cho1)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4-胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trind er反应)。醌亚胺的最大吸收在500 nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。 2 试剂 (1)酶试剂：组成因不同商品试剂盒而异，酶用量也因酶制品质量而定。 (2)chol标准参考血清：本法TＣ测定中以准确定值的参考血清为标准，参考血清的Chol浓度最好有高、中、低3种，中浓度血清的Chol含量应在3.8～5.2mmol／L。 (3)试剂与参考血清的稳定性：未开瓶的试剂4℃存放至少稳定1年。复溶后的酶试剂在2～8℃至少稳定1周，15～25℃3天，如在此期内出现肉眼可辨的粉红色为不合格。标签上注明出品日期及有效期。 液态的Chol参考血清(含有不抑制CHE、CHOD与POD的防腐剂)，-20℃保存至少稳定2年，冻干品更稳定。标签上注明出品日期及有效期。 3 操作 (1)标本为及时分离的空腹血清、肝素或ED-TA抗凝血浆。 (2)终点法测定时标本管与标准管中分别加入标本与定值血清各10mu;l，酶试剂1ml，混匀后在37℃放置5分钟，或20-25℃放置10分钟后用光度计比色，以试剂空白调零，波长500nm或520nm，颜色稳定至少60分钟。 4 计算 TC(mmol／L)=A测定／A标准times;定标血清TC浓度(mmol/L)。 速率法测定根据仪器性能及所用试剂的反应速度设计操作程序，一般要求试剂中酶用量较高。 5 技术指标 (1)精密度：终点法批内CVlt;1.5％，批间CVle;2.5％。 (2)准确性：以参考方法(ALBK法)定值的血清为标准液时，本法测定结果与ALBK法基本一致。以Chol水溶液为标准时，结果往往比AL-BK法低，故不宜采用Chol水溶液。 (3)灵敏度：显色剂用酚时，TC 5.2 mmol/L(200mg/d1)时的吸光度A500nm0.30-0.35，故A500nm=0．005时的TC浓度约0.08mmol/L(3mg/d1)。 (4)测定范围：血清与酶试剂用量之比为1：100时，测定上界为13mmol/L(500mg/d1)。 (5)特异性：血清中多种非胆固醇甾醇会不同程度地与本试剂显色。正常人血清中非胆固醇甾醇约占TC的l％，故在常规测定时这种影响可以不计。 (6)干扰因素：终点法中血红蛋白高于2g/L时会引起正干扰。胆红素gt;0.1g/L时有明显负干扰。维生素Ｃ与甲基多巴血中浓度高于治疗水平时也使结果偏低。上述干扰物在速率法中影响较小。高TG血症(血清混浊)在本法中(血清与试剂量1：100时)一般无明显影响。 6 参考值 人群血脂水平主要决定于生活因素，特别是饮食营养，所以各地区调查所得参考值高低不一，以致各地区有各自的高TC划分标准。现在国际上以显著增加冠心病危险的TC水平作为划分界限，在方法学标准化的基础上，采用共同的划分标准，有助于避免混乱。 (1)我国《血脂异常防治建议》提出的标准(1997，6)为：理想范围lt;5.2mmol/L(lt;200mg/d1)；边缘升高：5.23～5.69 mmoL/L(20l～219mg/dl)，升高ge;5.72mmol/L(ge;220mg/dl)。 (2)美国胆固醇教育计划(NCEP)，成人治疗组(Adult Treat- ment Pannel；简称ATP)1994年提出的医学决定水平：理想范围lt;5.1mmol/L(lt;200mg/d1)；边缘升高5.2～6.2