冠心病基因治疗PPT.pptVIP

基因治疗 2013/4/28 病例分析 之 11级9班 主要内容 1 目的基因的选取 2 导入载体的选择 3 基因导入的方式 4 其他问题 2 导入载体的选择 3 基因导入的方式 4 其他问题 1 目的基因的选取 通过增加内源的抗氧化储备达到减少氧化应激对缺血心肌损伤的目的 抗氧化 应激 抗炎症 反应 导入炎症抑制基因可以在炎症发生前对心肌梗死生抑制作用 纠正 脂代谢异常 家族性高胆固醇血症是一种由LDL受体功能或表达异常引起的常染色体性遗传病,导入正常基因可有效抑制脂代谢异常 抗内皮 增殖 血管的重塑、平滑肌细胞增殖迁移和细胞外基质的积聚而导致内膜的增生，是影响远期疗效的重要原因植入抗内皮增殖基因可有效防止在狭窄。 1 目的基因的选取 2 导入载体的选择 3 基因导入的方式 4 其他问题 研究发现, 外源性给予某些多肤类生长因子能促进动物缺血组织的新生血管形成和侧支循环建立, 改善组织缺血。其中血管内皮生长因子(VEGF)是目前公认的最具特异性和强大的生长因子。 1 目的基因的选取 2 导入载体的选择 3 基因导入的方式 4 其他问题 一类特异作用于血管内皮细胞的糖蛋白, 具有促进内皮细胞分裂、增值, 以及诱导血管生成的作用 VEGF促进血管内皮细胞增殖的作用具有相对特异性, 对血管壁的平滑肌细胞和成纤维细胞没有影响, 因此可以避免在发挥促血管生成作用时引起血管内膜异常增生等副作用。 VEGF为分泌性蛋白,有信号肽序列,合成后分泌到细胞外, 以旁分泌或自分泌方式作用于靶细胞的VEGF受体 VEGF bFGF 虽然可能更快地促进新生血管的生成，但是由于bFGF促进VSMC和成纤维细胞的增殖和迁移，促进血管内膜的增生，引起血管的重塑和再狭窄的发生。 VEGF和Ang-1基因联合可能效果更好！ * 2 导入载体的选择 1 目的基因的选取 3 基因导入的方式 4 其他问题 (l) 能在宿主细胞内进行独立和稳定的自我复制 (2) 易于从宿主细胞中分离并进行纯化 (3) 在其序列中具有适当的限制性内切酶位点, 在这些位点上插入外源基因不影响载体自身复制 * 腺病毒 载体 逆转录病毒 载体 裸质粒 载体 2 导入载体的选择 1 目的基因的选取 3 基因导入的方式 4 其他问题 腺病毒原理 主要优点 缺点和改进方向 1 目的基因的选取 3 基因导入的方式 4 其他问题 腺病毒是一种无包膜的DNA双链病毒，该载体多是在2型或5型腺病毒的基础上构建而来。 腺病毒 载体 腺病毒原理 主要优点 缺点和改进方向 1 目的基因的选取 3 基因导入的方式 4 其他问题 腺病毒 载体 基因容量大,外源基因表达水平高 病毒滴度高，转移效率高 可感染分裂和未分裂细胞 不整合至细胞染色体, 对人类相对比较安全 2 课题总结 3 实验方案 4 实验进度 缺点 改进方向 缺乏持久的表达, 易激活免疫系统, 重复使用转导效率明显降低 腺相关病毒载体(adenoviral一associatedv irus,AAV) AAV是一种单链DNA微小病毒，也是一种缺陷病毒。它也可以感染分裂期和非分裂期的细胞，无致病性，安全性高，基因表达稳定。 腺病毒 载体 逆转录病毒载体原理 主要优点 缺点和改进方向 1 目的基因的选取 3 基因导入的方式 4 其他问题 逆转录病毒是一种经修饰的RNA缺陷病毒，其复制所需要的基因被除去而代之为治疗性基因和选择性标记物 逆转录病毒 载体 腺病毒原理 主要优点 缺点和改进方向 1 目的基因的选取 3 基因导入的方式 4 其他问题 载体构建简单, 宿主范围广 病毒转染效率高，表达持久 逆转录病毒 载体 2 课题总结 3 实验方案 4 实验进度 改进方向 缺点 逆转录病毒难以纯化和浓缩, 病毒制备滴度低 只能转染增殖期的靶细胞 易被血液中成分中和 且不稳定, 有插人性基因突变的危险 中国医学遗传学国家重点实验室夏家辉院士在 细胞遗传学研究的基础上发现人的双随体小染色体 具有遗传稳定、无免疫原性、携带外源基因容量足够 大等特点, 并利用该小染色体研制出人D 、G 组染色 体短臂导向的基因治疗新载体一人源基因载体 裸质粒载体 主要优点 缺点和改进方向 1 目的基因的选取 3 基因导入的方式 4 其他问题 将含有外源基因的纯化闭环质粒DNA直接转导心脏并在心肌中表达蛋白。 裸质粒 载体 腺病毒原理 主要优点 缺点和改进方向 1 目的基因的选取 3 基因导入的方式 4