钛颗粒刺激人血单个核细胞HMGB1、NF-B、MIF表达的研究.docVIP

精品论文 参考文献 钛颗粒刺激人血单个核细胞HMGB1、NF-B、MIF表达的研究 　何磊 赵丽 秦智敏 赵静 　　邯郸市第一医院 056002 　　摘要：目的 观察钛颗粒刺激人血单个核细胞(peripheral blood monocytes ,PBMC)表达HMGB1、MIF的情况，为临床防治膝关节置换术后无菌松动提供新的思路和方法。方法 培养人血单个核细胞，用培养液、钛颗粒及LPS刺激，通过ELISA方法检测HMGB1、NF-?B和MIF表达。结果 将分离得到的人血单个核细胞培养后分为3组，分别为空白对照组(PBMC+培养液)、钛颗粒组(0.1%钛颗粒+PBMC+培养液)、阳性对照组(LPS+PBMC+培养液)，观察24h后，采用ELISA方法测定HMGB1、NF-?B和MIF表达情况。采用SPSS13.0进行统计学分析，检验水准为?=0.05。结果 HMGB1在钛颗粒刺激下表达6.73plusmn;0.19 ng/ml，空白组表达为1.86plusmn;0.24 ng/ml，两组对比差异有统计学意义（p=0.000lt;0.01），阳性组表达为7.51plusmn;0.32 ng/ml，与钛颗粒组比较差异无统计学意义（pgt;0.05）；MIF在钛颗粒刺激下表达7.74plusmn;0.19ng/ml，空白组表达为3.93plusmn;0.11ng/ml，两组对比差异有统计学意义（p=0.000lt;0.01），阳性组表达为9.16plusmn;0.55ng/ml，与钛颗粒组比较差异无统计学意义（pgt;0.05）；NF-?B在钛颗粒刺激下表达18.76plusmn;1.15，空白组表达为9.57plusmn;1.38ng/ml，两组对比差异有统计学意义（p=0.02lt;0.05），阳性组表达为20.31plusmn;1.02ng/ml，与钛颗粒组比较差异无统计学意义（pgt;0.05）；结论 钛颗粒刺激人血单个核细胞激活NF-?B通路，且HMGB1、MIF作为免疫炎性因子合成释放增多，参与膝关节置换术后关节无菌松动的发生发展。 　　关键词 钛颗粒 人血单个核细胞 高迁移率族蛋白B1 巨噬细胞移动抑制因子 核转录因子 　　【中图分类号】R542.2 【文献标识码】A 　　材料与方法 　　1.1主要试剂 NF-?B、MIF、HMGB1的ELISA试剂盒（天津灏洋生物制品科技有限责任公司公司）；钛颗粒（美国Alfa Aesar公司）用无菌PBS配制成浓度为0.05%、0.1%及1.0%的悬液。 　　1.2人血单个核细胞培养 应用淋巴分离液和Percoll液进行梯度离心分离外周血单个核细胞，取0.5ml细胞样本进行细胞计数后，加入培养液（RPMI-1640：胎牛血清：抗菌液：左旋谷氨酸=100:10:1:1）。调整1ml培养液中含有1times;106细胞。 　　1.3细胞活力（MTT）检测 采用MTT比色法测定钛颗粒对细胞活力的影响，将细胞接种于96孔板（约5times;104个/孔），分为4组：第1组不加钛颗粒，第2、3、4组分别加入浓度为0.05%、0.1%及1.0%的钛颗粒悬液。观察24h后，进行MTT检测。 　　1.4钛颗粒刺激后炎症因子蛋白情况检测 将培养的人血单个核细胞按照1times;106个/孔接种于24孔板，分为3组：第1组为阴性对照组（PBMC+培养液）、第2组为钛颗粒组 （0.1%钛颗粒+PBMC+培养液）、第3组为阳性对照组（LPS+PBMC+培养液），培养24h，用ELISA方法检测HMGB1、NF-?B、MIF的表达。 　　1.5统计学方法 统计分析采用SPSS13.0软件，用单因素方差分析方法，检验水准?=0.05，所有数据均使用（均数plusmn;标准差）表示。 　　2结果 　　2.1MTT检测结果 空白对照组、不同浓度钛颗粒刺激组在24h时间点，细胞活性检测结果比较无统计学意义（P＞0.05）。见图1。 　　注：a为钛颗粒组与空白组对比pa1=0.000lt;0.01,pa2=0.02lt;0.05,pa3=0.000lt;0.01;b为钛颗粒组与阳性组对比 pb1gt;0.05, pb2gt;0.05, pb3gt;0.05 　　3.讨论 　　人工膝关节置换疗效的确切性及可预期性，使更多患者易于接受人工膝关节置换，人工关节的无菌性松动，是人工膝关节置换失败的最主要原因，目前防治人工膝关节置换松动是人工关节外科最重要的课题。 　　已有研究证实单核巨噬细胞、成纤维细胞、成骨细胞等在人工关节磨损微粒刺激下产生大量炎性破骨细胞因子，导致假体周围骨溶解。其中巨噬细胞对磨损颗粒的吞噬所产生的一系列反应是最主要的原因，目前认为，巨噬细胞的数目与骨吸收的程度之间有着直接的关系。巨噬细胞