铁基支架材料与内皮细胞凋亡的关系及影响.docVIP

精品论文 参考文献 铁基支架材料与内皮细胞凋亡的关系及影响 西南交通大学生命科学与工程学院 刘志文 　　摘要：可降解生物材料可以克服非降解生物材料的诸多负面问题，如血管内膜增生、血管再狭窄等。探究可降解铁基支架的细胞相容性为开辟新型支架材料提供了理论基础。本次研究采用体外实验、接触培养法，以316L 不锈钢作为对照材料，通过荧光染色、流式细胞仪分析等手段综合评价可降解铁基支架材料的细胞相容性。研究最后发现，可降解铁基材料在细胞相容性方面未达到预期效果。 　　关键词：可降解；细胞相容性；荧光染色；流式细胞仪分析1、前言生物材料的细胞相容性指的是细胞在材料表面的黏附和生长能力，一种理想的生物材料不仅要具备出色的物理机械特性，还应该具备良好的细胞相容性[1]。近几十年来，非降解金属材料成为了人们的研究热点，如316L 不锈钢、CoCr 合金、Ti 和TiNi 合金等。这些材料做出来的血管支架在生物材料方面取得了巨大成功。但是由它们的非降解性所引起的炎症反应、支架内血栓形成等问题却深深地困扰着研究者们。为了解决这些问题，可降解生物材料的应用为此提供了新思路。 　　铁是一种良好的可降解生物材料。研究可降解铁基支架材料的细胞相容性为开发新型生物材料提供了理论基础，如果能将它应用于支架领域，那么它会大大地降低支架成本。 　　2、材料和方法2.1 主要试剂和仪器设备吖啶橙（AO）、碘化丙啶（PI）、FITC、二氧化碳培养箱、无氧培养箱、超声波清洗机、超净工作台、自动打磨机、倒置荧光显微镜、流式细胞仪2.2 材料的制备及处理购买直径为35mm 的纯铁铁片及316L 不锈钢，用pH 约为3 的稀盐酸浸泡，然后用超声波清洗机清洗，之后打磨抛光，最后用丙酮、无水乙醇各清洗三次，保持材料表面干燥，放入无氧培养箱中保存。 　　2.3 吖啶橙、碘化丙啶染色观察分别搜集培养了24h、72h、120h 的内皮细胞，用吖啶橙、碘化丙啶对细胞进行荧光染色，然后在倒置荧光显微镜下观察，搜集荧光图片。 　　3、实验结果3.1 AO/PI 染色AO 染料具有膜通透性，能透过正常细胞膜，使核DNA 和RNA 染色，呈绿色或黄绿色荧光，主要用于检测正常细胞或者早期凋亡细胞。PI 也是一种DNA 染色剂，常用于细胞凋亡检测，在嵌入双链DNA 后释放红色荧光。由染色原理知，绿色荧光代表正常细胞，橙黄色荧光代表凋亡细胞。根据染色的结果，我们可以发现随着时间推移，橙黄色的荧光越来越强，细胞的生长形态也发生了巨大变化，这说明细胞的凋亡程度越来越严重，并且与铁接触培养的细胞凋亡程度更严重。 　　3.2 流式细胞仪分析流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量。本次研究利用AnnexinV-FITC/PI 双染色法流式细胞仪检测技术鉴定细胞与铁基材料和316L 不锈钢接触生长的情况。 　　分析不同状态细胞的生存比例如表1 所示，我们可以发现与铁接触培养的细胞在不同时间段晚期凋亡的情况总是比316L 不锈钢严重，这说明铁基材料有促进细胞从早期凋亡向晚期凋亡转变的作用，这一结果与前期定性染色的结果大致吻合。 　　4、讨论从上述的实验结果来看，铁基支架材料的细胞相容性未达到预期效果，与对照组316L 不锈钢相比，它促凋亡的作用更明显。造成这一现象的主要原因是降解的铁离子浓度过高??对细胞造成了局部毒性。 　　本次研究只是对铁基材料细胞相容性的一次初步性探究，其试验条件还有许多需要改进的地方。此次研究为铁基材料的制备提供了一些借鉴。如今为了增强铁基材料的细胞相容性，许多研究者对铁基材料进行了改进，如加入其它金属，做成铁合金或者对铁基材料进行表面改性等。在不久的将来，希望研究者们可以尽快制备出即具有良好物理特性，同时又具备良好生物相容性的铁基支架材料。 　　参考文献：[1] Moravej M ， Mantovani D. Biodegradable metals forcardiovascular stent application：interests and new opportunities.International journal of molecular sciences 2011;12：4250-70.