阴黄证动物模型造模药物的筛选研究.docVIP

精品论文 参考文献 阴黄证动物模型造模药物的筛选研究 黑龙江中医药大学 黑龙江哈尔滨 150040 【摘 要】目的：建立一种理想的阴黄证动物模型。方法：通过分析阴黄证的形成机理，采用大黄灌胃的方法，先造成大鼠素体阳虚的背景，再分别以四氯化碳、氨基半乳糖、alpha;-萘异硫氰酸酯、乙醇诱导大鼠肝损伤。通过对大鼠一般生物学状态的观察、生化指标、放免指标的综合分析，对以上几种肝损伤造模药物进行筛选，选择最符合阴黄证形成机理的几种造模因素优化组合，从而建立符合阴黄证症候特点的动物模型。结论：选取大黄、乙醇、alpha;-异硫氰酸萘酯作为阴黄证动物模型的造模药物。 【关键词】阴黄证；动物模型；大黄；四氯化碳；氨基半乳糖；alpha;-萘异硫氰酸酯；乙醇 【中图分类号】R965.1 【文献标识码】B 【文章编号】1674-8999（2015）9-0820-02 中医学将黄疸分为阳黄与阴黄两大类。但阳黄易识,阴黄难辨。由于没有理想的中医阴黄证动物模型，治疗阴黄证有效药物的研发受到了限制。本研究依据阴黄的成因，在原有寒证模型和肝损伤模型的基础上将造模因素进行优化组合,建立一种符合传统中医学阴黄证病因病机的阴黄证动物模型。 1 实验材料 大黄；四氯化碳（分析纯）；D-氨基半乳糖；alpha;-异硫氰酸萘酯(ANIT);无水乙醇(分析纯)；戊巴比妥钠；橄榄油；AST试剂盒；ALT试剂盒；ALP试剂盒；TBIL试剂盒；DBIL试剂盒；IL-2试剂盒；cAMP试剂盒；cGMP试剂盒。雄性Wistar大鼠,体重180plusmn;20g。 2 实验方法 2.1 大黄供试品溶液的制备 取大黄2000g,冷水浸泡后煎煮，所得药液为供试液。 2.2 CCL4的配置与剂量 取4ml橄榄油置于容量瓶中，加入2ml CCL4，再加入4ml橄榄油，超声混匀，配制20%的CCL4橄榄油溶液，灌胃剂量为1ml/kg。 2.3 氨基半乳糖的配置与剂量 精密称量2.0g氨基半乳糖粉末，溶于20ml生理盐水，超声混匀，配制100g/l的氨基半乳糖溶液。 2.4 alpha;-萘异硫氰酸酯(ANIT)橄榄油溶液的配置与剂量 3.2galpha;-萘异硫氰酸酯(ANIT)粉末，溶于80ml橄榄油中,作为供试液。 2.5 乙醇溶液的配置与剂量 将等体积无水乙醇溶于等体积纯净水中，配制50%（v/v）乙醇溶液。 2.6 造模方法 50只Wistar大鼠随机分为5组，空白组、大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄alpha;-萘异硫氰酸酯组、大黄乙醇组。 空白组：每天灌胃0.9%生理盐水1ml/100g，连续14天。 大黄四氯化碳组：每天灌胃给予大黄煎剂1ml/100g连续给药14天。第14天灌胃给予20%的CCL4橄榄油溶液，灌胃剂量为1ml/kg。 大黄氨基半乳糖组：每天灌胃给予大黄煎剂1ml/100g连续给药14天。第14天腹腔注射氨基半乳糖600mg/kg。 大黄alpha;-萘异硫氰酸酯组：每天灌胃给予大黄煎剂1ml/100g连续给药14天。第12天灌胃给予4%ANIT橄榄油溶液150mg/kg，第13天灌胃给予4%ANIT橄榄油溶液50mg/kg。 大黄乙醇组: 每天灌胃给予大黄煎剂1ml/100g连续给药14天。于第10天起每天灌胃给予乙醇50%(v/v)连续5天(5g/kg)。 各组动物于第15天称重后取材。 2.7 数据处理 所有数据均以plt;0.05判定具有统计学意义。 3 结果 3.1 大鼠一般生物学状态观察 大鼠灌服大黄供试液后，出现便溏、蜷缩、倦怠、活动减少等脾阳虚症状。分别给予四氯化碳、D-氨基半乳糖、alpha;-异硫氰酸萘酯、乙醇后各模型组大鼠均出现毛竖起 、拱背、毛发枯而蓬乱不泽的症状。大黄alpha;-异硫氰酸萘酯组大鼠症状最明显，且排尿明显增多，尿液呈深黄色。 3.2 血清中IL-2及cAMP/cGMP的测定 与正常对照组相比，大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄alpha;-萘异硫氰酸酯组、大黄乙醇组血清IL-2明显升高，有显著性差异（Plt;0.01），表明机体免疫功能受到抑制，其中大黄乙醇组血清IL-2升高幅度最大。与正常对照组相比，大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄alpha;-萘异硫氰酸酯组、大黄乙醇组血清cAMP/ cGMP值明显降低，有显著性差异（Plt;0.01），其中大黄乙醇组血清cAMP/ cGMP值降低幅度最大 3.3 血清中AST、ALT、ALP活性的测定 与正常对照组相比，大黄四氯化碳组、大黄氨基半乳糖组、大黄alpha;-萘异硫氰酸酯组血清AST、 ALT、ALP活性明显升高，有显著