顺铂增强抗人DR5单克隆抗体对白血病U937细胞的凋亡作用.docVIP

精品论文 参考文献 顺铂增强抗人DR5单克隆抗体对白血病U937细胞的凋亡作用 丁春生1 王 靖2 （1河南大学消化病研究所 河南开封 475001；2河南大学第一附属医院 河南开封 475001） 【中图分类号】R733.7 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)30-0027-02 【摘要】 通过探讨鼠抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)与顺铂(DDP)联合应用对白血病细胞U937凋亡作用的影响，得出结论：抗人DR5单克隆抗体mDRA-6与DDP对U937细胞具有显著的协同杀伤作用。 【关键词】 DR5 单克隆抗体 顺铂 白血病细胞 凋亡 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）是TNF超家族成员，能够诱导多数肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞无影响[1,2]，被誉为最有前景的抗肿瘤药物。但TRAIL的肝毒性限制了其临床应用。TRAIL受体的单克隆抗体能够模拟TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡，且对肝细胞无毒性作用，此类功能性抗体具有广泛的抗肿瘤应用前景。本实验通过观察抗TRAIL受体DR5的单克隆抗体mDRA-6与低毒剂量顺铂(DDP)联用对白血病细胞U937的凋亡诱导作用，以确定DDP与mDRA-6联合应用是否具有协同效应。 1 材料与方法 1.1 材料 鼠抗人DR5功能性单克隆抗体mDRA-6由河南大学医学院免疫学教研室制备(利用亲和层析方法纯化)。U937细胞购于中国医学科学院上海细胞生物研究所。RPMI Medium 1640、四氮唑蓝（MTT）、DMSO 购于GIBCO公司；倒置显微镜；数码相机（spot）为Nikon公司产品；全自动酶标仪为Thermo labsystems公司产品。 1.2 实验方法 1.2.1 细胞培养 U937细胞培养于含10％FBS的RPMI1640培养基中，常规加入青霉素(105 U/L)与链霉素(100mg/L)，于37℃，5%CO2培养箱中培养, 培养至对数生长期用于实验。 1.2.2 MTT法检测mDRA-6及联合DDP对U937细胞的毒性作用 取对数生长期U937细胞制备成细胞悬液，每孔加100mu;l的U937细胞悬液(3times;104/孔)至96孔细胞培养板中。随机分为三组，DDP组加入终浓度分别为0.2、0.39、0.78、1.52、3.13、6.25、12.5、25、50mu;g/ml的DDP，mDRA-6组加入终浓度分别为0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.25、2.5、5、10mu;g/ml的mDRA-6，联合组加入 10mu;g/ml的DDP及上述浓度的mDRA-6。同时设空白和阴性对照。每孔终体积200mu;l，置37℃，50ml/LCO2培养箱内培养12h。离心，更换培养液，加入MTT(5mg/L)工液20mu;l/孔，继续培养4h。离心，小心吸出上清，每孔加入150mu;lDMSO，振荡混匀，用全自动酶标仪在波长570nm下测OD吸收值。每一浓度设3个复孔，实验重复3 次。计算细胞抑制率=(1-实验组OD值/对照组OD值)times;100%。 1.2.3 凋亡细胞形态观察 细胞同上分组及处理12 h后用，倒置显微镜照相，记录细胞形态学变化。 1.2.4 DNA片段梯度分析 调整U937细胞数为1times;107/瓶，分别加DDP, mDRA-6及mDRA-6+DDP，mDRA-6终浓度为5mu;g/ml，DDP终浓度为10mu;g/ml,置培养箱内培养4h。收集细胞, 800rpm离心5min, 弃上清，TBS洗1次，加蛋白酶K、RNase及DNA提取液，提取细胞DNA,进行1%琼脂糖凝胶电泳, EB (终浓度为0.5mg/L)染色1h,水脱色1小时,紫外下观察电泳条带并拍照。 1.3 统计学方法 实验数据用chi;-plusmn;s表示，组间比较采用t检验。 2 结果 mDRA-6浓度 图1 10mu;g/ml DDP与不同浓度mDRA-6联合对U937细胞生长抑制曲线 2.1 mDRA-6、DDP对U937细胞的生长抑制作用 DDP对U937细胞具有杀伤作用，并呈明显的剂量依赖性，1.25mu;g/ml的mDRA-6与12.5mu;g/mlDDP分别作用U937细胞12h，细胞死亡率分别为15.12%和17.72%；1.25mu;g/ml的mDRA-6联合10mu;g/ml的DDP，U937细胞死亡率增至59.02%。