毛细电泳法的进展与应用.doc

毛细电泳法的进展与应用 摘要：对毛细管电泳进行了概述,分析了毛细管电泳的基本原理及进展，着重探讨毛细管电泳在医疗卫生药物分析以及蛋白质和多肽检测中的应用. 关键字:毛细管电泳 药物分析 蛋白质 多肽 应用 进展 1.毛细管电泳概述 毛细管电泳是20世纪80年代后期分析化学，特别是生物分析化学的重大研究进展，也是目前发展最为迅速的电泳分离手段之一，又称“高效毛细管电泳（HPCE）”，它是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据试样中各组分间迁移率和分配行为上的差异而实现分的一类分离技术。毛细管电泳设备采用硅烷类石英毛细管柱作为分离部件，毛细管柱内50~100μm，电场强度可达1kV/cm，电流范围为10~20mA。由于表面积大，散热迅速，并且分离时间短，有效地提高了分离效率。 毛细管电泳具有快速、高效、高灵敏度、易定量、重现性好及自动化等优点，已广泛地应用于小分子、小离子、多肽及蛋白质的分离分析研究。它又在核酸分离方面显示出巨大的潜力。电流通过导体时产生焦耳热。传统平板凝胶电泳的最大局限性在于其无法克服两端高电压带来的焦耳热所产生的负面影响。焦耳热可使筛分介质内部出现温度、粘度及分离速度的不均一，影响迁移、降低效率、使区带变宽。由于这种负面影响与电场强度成正比，所以极大地限制了高电压的引入。也难以提高电泳速度。毛细管电泳使样品在一根极细的柱子中进行分离。细柱可减小电流，使焦耳热的产生减少；同时又增大了散热面积，提高散热效率，大大降低了管中心与管壁间的温差，减少了柱子径向上的各种梯度差，保证了高效分离。因此可以加大电场强度，达到100～200V/cm，全面提高分离质量。 2.毛细电泳技术在医疗卫生领域的应用 2. 1 CE在药物成分分析中的应用 目前 ,CE在天然中草药分析领域中的应用主要集中在生物碱和黄酮及其甙类方面 ,蒽醌类分析也有报道。生物碱有类似于碱的性质 ,在pH 7的缓冲液中利用 CZE 分离。纪秀红等选取马钱子碱为内标物 ,在磷酸/甲醇缓冲溶液中 ,测定了小檗碱、 巴马亭、 药根碱的含量。黄酮类化合物大多是中性分子 , 主要采用 MECC 模式分离。Li Y M以SDS(十六烷基磺酸钠)为阴离子表面活性剂将黄芩中的 6 种主要的黄酮类化合物分离。李伟等以磷酸盐为缓冲体系 ,利用 CZE模式分离、 测定了大黄提取液中离蒽醌化合物的含量。 2. 2 CE在手性拆分中的应用 CE因其高效、 快速、 选择性强的特点而成为目前最有效的手性拆分方法。各种 CE 分离模式皆可用于对映异构体分离 ,因此手性拆分成为 CE应用最活跃、 最独特的领域。其中 ,添加剂法只需向电泳缓冲液中加入合适的手性试剂 ,经过一定的分离条件优化即能实现手性分离。又因为可选择的添加剂种类很多 ,此法是 CE进行手性拆分的主要形式。目前 ,主要的手性添加剂有环糊精类(CDs) 、冠醚类、大环抗生素、蛋白质等。仅环糊精一类就有α CD ,β CD ,γ CD , HP α CD , CMβ CD , DM β CD 等多种添加物质 ,其应用十分广泛。此外 ,其他种类添加剂的应用结合 MECC和 NACE 模式基本上能实现各种手性药物的拆分CE也可以用于药物生产过程全方位控制与检测 ,以保证药物质量 ,提高工艺水平。例如在优化氯苄律定合成的工艺中 ,以盐酸奎宁为内标 ,利用CZE分离了黄连素、 四氢黄连素和氯苄律定牛长群等成功利用 CE检测了青霉素发酵过程中的 5 种主要成分。CE还在体液中药物的测定、违禁药物分析和临床治疗诊断上有很广泛的应用。 采用HPCE分析血清蛋白质获得的结果稳定，并能准确计算各蛋白质的相对浓度，避免了凝胶电泳法染色、脱色过程中多种影响因素造成的误差，而且HPCE法的结果重复性好，可信度高，便于贮存和检索。前白蛋白在血清中的浓度可以表明营养状态，而且是确定恶性肿瘤、炎症、肝硬化、何杰金氏病的重要指标，多数电泳法难以分辨，而用HPCE法很容易分离定量，检测波长为214或200nm。毛细管电泳（CE）增加了白蛋白部分的分辨率，这使得对双白蛋白血症检测的灵敏度有了很大的提高。HPCE与PCR联用可以用来对传染性疾病、肿瘤和遗传病进行分子生物学的诊断。以毛细管凝胶电泳分离血液中HIV-1的PCR产物，并采用紫外光和荧光检测，是应用较早的PCR产物的HPCE分析。研究急性白血病的蛋白质组学奠定了基础。KelvinH．Lee等用双向电泳发现脑脊液中的130／131两个蛋白可作为Creutzfeldz—Jakob病的分子标记，这两个蛋白质属于14-3-3蛋白家族。丹麦的J．E．Cells系统研究了不同的膀胱癌组织样品，发现了一系列可用于肿瘤组织分级和区分肿瘤和正常膀胱上皮组织的分子标记如kerati