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1504 郭晓晨 等/聚羟基丁酸路径在克雷伯氏菌中的构建 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology October 25, 2013, 29(10): 1504−1514 /cjbcn ©2013 Chin J Biotech, All rights reserved 研究报告 聚羟基丁酸路径在克雷伯氏菌中的构建 1,2 2 1 2 3 郭晓晨 ，刘宏娟 ，王艳萍 ，张建安 ，刘德华 1 天津科技大学 食品工程与生物技术学院，天津 300457 2 清华大学 核能与新能源技术研究院，北京 100084 3 清华大学 化工系，北京 100084 郭晓晨, 刘宏娟, 王艳萍, 等. 聚羟基丁酸路径在克雷伯氏菌中的构建. 生物工程学报, 2013, 29(10): 1504−1514. Guo XC, Liu HJ, Wang YP, et al. Construction of polyhydroxybutyrate pathway in Klebsiella pneumoniae . Chin J Biotech, 2013, 29(10): 1−11. 摘 要: 以生物柴油的副产物甘油生产高附加值的1,3-丙二醇，现已成为提升生物柴油产业链经济性的重要途 径，而中间代谢产物3-羟基丙醛积累造成细胞死亡，发酵异常终止是生物法生产 1,3-丙二醇过程中的关键问题。 不同于传统的降低 3-羟基丙醛积累的思路，本文从增强克雷伯氏菌对 3-羟基丙醛的抗逆性出发，改善克雷伯 氏菌1,3-丙二醇的生产性能，首次将聚羟基丁酸路径引入克雷伯氏菌中，构建了新型基因工程菌，并对其1,3- 丙二醇发酵性能及聚羟基丁酸代谢进行了初步的研究。经IPTG 诱导，工程菌中检测到聚羟基丁酸，其含量随 IPTG 浓度增加而增大。优化的IPTG 浓度为0.5 mmol/L 。初始甘油50 g/L 时，野生菌可正常发酵生产1,3-丙 二醇，1,3-丙二醇浓度达到22.1 g/L ，其质量得率为46.4% 。当初始甘油达到70 g/L 时，由于高浓度3-HPA 积 累，野生菌发酵终止，而工程菌可正常发酵生产1,3-丙二醇，PDO 产量可达31.3 g/L ，其质量得率为43.9% 。 同时检测到聚羟基丁酸积累。研究结果有助于加深对克雷伯氏菌1,3-丙二醇代谢机理的认识，为克雷伯氏菌的 进一步优化提供了新的思路。 关键词: 1,3-丙二醇，克雷伯氏菌，3-羟基丙醛，聚羟基丁酸 Received: June 24, 2013; Accepted: September 29, 2013 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No.. Corresponding author: Hongjuan Liu. Tel/Fax: +86-10; E-mail: liuhongjuan@ 国家自然科学基金 (No. 资助。 郭晓晨 等/聚羟基丁酸路径在克雷伯氏菌中的构建 1505 Construction of polyhydroxybutyrate pathway in Klebsiella pneumoniae 1,2 2 1