菊苣质体同源片段的克隆及非抗生素标记的质体定点整合表达载体构建.PDFVIP

草 业 学 报 第 卷 第 期 ７２－８１ １８ ６ 　　　 　 　 　 　　　 　 年 月 ， ２００９ １２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ Ｖｏｌ．１８Ｎｏ．６ 　　　 　　　 菊苣质体同源片段的克隆及非抗生素标记 的质体定点整合表达载体构建   王玉华 ，郝建国，贾敬芬 （陕西省生物技术重点实验室 西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室 西北大学生命科学学院，陕西 西安 ７１００６９） 摘要：依据烟草、玉米、拟南芥和大豆质体基因组狉狊７基因和 １６犛狉犇犖犃基因的保守序列设计引物，以菊苣质体基 狆 因组 为模板， 扩增到 段 的片段。序列分析表明，该片段全长 （ 登录号为 ＤＮＡ ＰＣＲ １ ４．８ｋｂ ４７５１ｂ ＧｅｎＢａｎｋ ｐ ），包括 的 基因 端序列、 的 基因、 的 基因、 的 ＧＱ１９９４７８ ４４９ｂ 狉狊７ ５′ ７９３ｂ 狉狊１２ ７２ｂ 狋狉狀犞 １３１５ｂ １６犛狉犇犖犃 ｐ 狆 ｐ 狆 ｐ ｐ 基因 端以及大部分的基因间隔区，该序列与烟草对应区段的相似性为 ，与莴苣对应区段的相似性为 。 ５′ ９２％ ９７％ 以此片段作为定点整合外源基因的同源重组片段，构建了非抗生素标记的菊苣质体定点整合表达载体 ｐＪＢＡＤＨ ＧＦＰ，酶切分析及 ＰＣＲ检测证明构建的载体符合预期设计。该载体的构建为建立高效、稳定的菊苣质体转化和无 抗生素筛选体系奠定基础，为进一步通过质体基因工程手段将更多感兴趣的基因导入菊苣进行遗传改良，或以菊 苣质体作生物反应器生产动物口服疫苗等搭建技术平台。 关键词：菊苣；质体同源片段；非抗生素标记；定点整合；表达载体 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｑ９４３．２Ｓ５４０．３５３ Ａ １００４５７５９２００９０６００７２１０ 　　 　　  向细胞核导入外源基因的核基因转化技术已普遍应用于农作物改良中。然而，随着研究的深入，细胞核转化 　 技术逐渐暴露其种种难以克服的弊端：首先，外源基因的随机整合造成的转基因沉默严重影响了基因工程的应用 效果；其次，转基因植物的花粉飘逸带来的环境安全问题更成为人们关注的焦点，如果转化基因飘逸进入边缘杂 草就会改变物种间的竞争关系，破坏原有生态平衡；再次，在植物基因工程中，常选用细菌来源的抗生素基因作选 择标记筛选转化子，而它们在转基因植物（尤其是可食用植物）中的表达