第六章 基因工程抗体PPT.pptx

基因工程抗体;Emil von Behring, 1901, antitoxins;免疫球蛋白的功能;5;免疫球蛋白的水解片段;complimentarity determining region, CDR;;purple : HV CDR ( in both the ribbon and ball and stick views) green : antigen HV sequences contact the antigen.;the antibody molecular surface, with the PorA antigen superimposed. ;13;14;15;二、细胞工程抗体和基因工程抗体;1890年Behring和北里柴三郎等人发现白喉抗毒素，并建立了血清疗法，开抗体制药之先河。 1937年Tiselius等人用电泳法将血清分为白蛋白、甲种（α）球蛋白、乙种（ β ）球蛋白、丙种（ γ ）球蛋白，并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。 1975年K?hler and Milstein等首次利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体 (monoclonal antibody, MAb)。 1994年基因工程抗体。;;; 实际意义 （1）预防、治疗感染性疾病， 如：破伤风抗毒素血清 ? 抗破伤风， 胎盘球蛋白 ? 抗病毒感染等， 副作用：? 超敏反应。 （2）临床诊断， 如：肥达氏反应 --- 伤寒、副伤寒， 缺点：特异性差。 ;2、单克隆抗体（monoclonal antibody, McAb） 由单一克隆B细胞杂交瘤产生的，只识别抗原分子某一特定抗原决定簇的特异性抗体。 特点：具有高度均一性。 杂交瘤细胞： 骨髓瘤细胞 --- 无限增殖； 免疫B细胞 --- 合成、分泌特异性抗体。 杂交瘤技术 --- HAT培养基：次黄嘌呤(H), 氨基蝶呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)。; ; 实际意义： （1）抗原的纯化和结构分析； （2）细胞发生、分化及功能的阐明； （3）临床疾病的诊断和治疗， 如：免疫分子检测； 免疫导向药物治疗恶性肿瘤 --- McAb抗癌药物(毒素或 放射核素偶联)。 ;;单抗体内应用和疗效受限原因： 1.鼠源性单抗对人体有较强的免疫原性 2.注入人体的单抗在肿瘤部位的摄取量甚少 3.生产成本高,难于普及应用;人杂交瘤技术未获真正突破原因:融合率低、建株难、不稳定、产量低、人体不能随意免疫 新思路：尽量减少抗体中的鼠源成分，但又尽量保留原有的抗体特异性。 基因工程抗体：根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体，主要包括嵌合抗体、人源化抗体、小分子抗体、抗体融合蛋白和双特异性抗体。;27;; 第一代的抗体人源化—嵌合抗体 从杂交瘤细胞分离出鼠MAb功能性可变区基因，与人Ig恒定区（决定免疫原性）基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体。嵌合抗体由于这两部分在空间结构上相对独立，其独特的抗体亲和力保持得很好，但因鼠单抗可变区的存在，应用时仍有较强的免疫排斥反应。 ;Pr 鼠VH 人 CH Pr 鼠VL 人 CL;;第二代的抗体人源化——改型抗体;; 小分子抗体 人源化抗体属完全的抗体分子。通过基因重组技术，可以在保持原有抗原结合活性的基础上，把完整的抗体分子改造成较小的分子，称为小分子抗体。 根据其价数的不同可分为单价小分子抗体及多价小分子抗体。;单价小分子抗体 一、Fab抗体 　　Fab段由重链V区及CH1功能区与整个轻链以二硫键形式连接而成，主要发挥抗体的抗原结合功能。Fab抗体只有完整IgG的1/3。;二、单链抗体(ScFv) 定义：用基因工程方法， 将抗体VH和VL（重链和轻链可变区）通过一个连接肽连接而成的小