血凝原理chakan.ppt

仪器检测原理 凝固法 PT,APTT,TT,FIB(PT-Based FIB- Clauss), Factors II, V, VII, X, VIII, IX, XI, XII, Protein C, Protein S, APC-R, LAC,PCX,HPX 发色底物法 Anti-thrombin,Heparin(普通低分子), Plasminogen, Plasmin Inhibitor,  免疫比浊法 D-Dimer, vWF（活性及含量）, Free Protein S，VIII含量，HS-CRP 正在研发的实验项目：······ Photo-optic method:IL instrumentation 测量浊度的变化 它并不是一种由于颜色变化引起的吸收值的变化（区别于发色底物法) 为了避免干扰（胆红素，血红蛋白），通常选择高波长进行检测 凝固法检测史 手工法检测 反应在试管内发生(37° C水) 凝块形成，操作人员肉眼可见 操作人员记录时间 血凝常规检测 血浆或稀释血浆 (37°C孵育) + 试剂 (预加热 37°C) - 纤维凝块形成 - 纤维凝块形成所需时间 纤维蛋白凝块检测 所有的凝固反应均为纤维凝块形成过程的检测 如: PT, APTT, Fibrinogen Clauss, 因子检测, 等 持续检测光密度变化 (透射法或散射法） 凝固时间由数学运算法则决定 (域值, 第一演算法,第二演算法等) 仪器的运算法则决定反应时间 最经典的运算法则: 阈值，正好能产生特定效应的界限（反应浊度的变化) 第一法则 (反应速度) 第二法则 (反应加速度) 应用于下列情况: Example: 纤维蛋白原Clauss; delta信号弱, 当FIB浓度高时，曲线上升快，而浓度低时曲线上升缓慢。在某些标本中逆向检测的阈值用于曲线的末端是非常平坦的。 用于以下情况: 基线不总是平坦的 通常情况下，反应速度快 凝固曲线信号清晰，纤维蛋白形成过程中没有起伏 凝固的时间较长 (与阈值法或二阶导数法比较) 应用于以下情况: Example: Recombiplastin; 凝固曲线上升很快, 凝固曲线的形状清晰, 凝固时间较长 (与阈值法或二阶导数法比较) 一阶导数的曲线总是正的 (or zero) 用于以下情况: 基线不总是平坦的 通常情况下反应加速度快 凝固曲线信号清晰，在基线和凝块形成期无起伏 该运算法则主要应用于凝固反应试验(i.e. APTT type) 通常应用于下述情况: Example: APTT; 凝固曲线相对清晰，反应加速度快， 曲线外观没有大的起伏。 二阶导数曲线可正可负。 实际上，大部分凝固反应运算使用的是二阶导数。 少许情况下使用一阶导数。 其它一些反应使用阈值法更合适。 不同的运算法则由不同的试验所选择。 发色底物法 发色底物试验的基本反应是： 未稀释血浆或稀释后血浆(incubated at 37°C) + 试剂 (酶) -中间复合物 + 试剂(底物) 剩余的酶能水解特殊的底物， 去除pNA 分子，产生颜色反应。 发色底物法(如：抗凝血酶试验) Chromogenic Method pNA呈黄色，随后被分光光度计测量 (at 405 nm). 测量值与定标曲线比较得出浓度值。 发色底物法 免疫比浊法，Ｄ－二聚体检测　 免疫学方法 典型的曲线像一个大的 S 有一个初始的基线，一个上升阶段和一个终点 (平台期) 纤维蛋白的形成过程 纤维蛋白的形成过程 ACL系列凝血仪纤维蛋白原检测 PT衍生纤维蛋白原（PT based FIB ） Clauss法纤维蛋白原（Clauss FIB） FIB的检测方法 PT based FIB的基本原理 基于PT反应曲线光学差值与FIB浓度的线性关系 FIB的检测方法 Clauss法FIB的基本原理 FIB方法使用建议 首选Clauss方法—NCCLS推荐 如考虑测试成本，可选用PT based FIB做常规筛查，超出200-400mg/dL范围样品及OAT病人样品用Clauss法复查 Clause 方法与PT 衍生法结果比较口服抗凝药病人 标本: 411 正常人, 50 位口服抗凝药病人 方法: Clauss 和PT 衍生法 结果: Clauss PT derived 正常人 320±124 289±126 (mg/dl) 口服抗凝药病人421±1