基因在脐带间充质干细胞中的表达达.pdfVIP

J South Med Univ, 2014, 34(10): 1475-1480 doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2014.10.15 ·1475 · 基础研究 慢病毒介导慢病毒介导RNARNA 干扰沉默干扰沉默FasFas基因在脐带间充质干细胞中的表基因在脐带间充质干细胞中的表达达 1 1 1 1 2 3 4 王 露 ，翟玮玮 ，杨向荣 ，王 芳 ，李 见 ，张 强 ，李玉云 1 3 4 蚌埠医学院 临床检验诊断学实验中心，第一附属医院检验科，临床检验诊断学教研室，安徽 蚌埠 2 233030 ； 徐州市第四人民医院检验科，江苏 徐州 221009 摘要：目的应用慢病毒介导的RNA 干扰技术，构建Fas 基因的siRNA慢病毒表达载体，建立Fas 基因稳定干扰的人脐带间充质 干细胞（UC-MSCs ）株，为下一步使用低表达Fas 基因的UC-MSCs 治疗再生障碍性贫血奠定实验基础。方法 以人Fas 基因 mRNA 序列作为干扰靶点，设计4 组靶向Fas 的shRNA序列，合成寡核苷酸，与经过BamHI、EcoRI 双酶切后的LV3 载体连接获 得重组慢病毒，通过感染293T 细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养人UC-MSCs ，使用包装好的慢病毒感染 UC-MSCs ，应用Real time- PCR 和Western blotting 检测感染后细胞中Fas mRNA 及蛋白的表达情况。结果 经酶切以及基因测 8 TU/ml。Real time-PCR 和Western blotting 结果显示干扰组细胞的Fas 序鉴定证明慢病毒载体构建成功，病毒悬液滴度为3×10 表达水平较对照组显著降低。结论 慢病毒介导的SiRNA能有效沉默UC-MSCs 中Fas 基因的表达。 关键词：慢病毒；siRNA ；Fas ；脐带间充质干细胞 Lentivirus-mediated stable Fas gene silencing in human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells 1 1 1 1 2 3 4 WANG Lu , ZHAI Weiwei , YANG Xiangrong , WANG Fang , LI Jian , LI Qiang , LI Yuyun 1 3 Clinical Laboratory and Diagnostic Center , Clinical Laboratory, First Affiliated Hospital , Department of Laboratory and Diagnostic Medicine4, Bengbu Medical College, Bengbu 233030, China; 2 Clinical Laboratory, Xuzhou Fourth Peoples Hospital, Xuzhou 221009, China Abstract: Objective To construct a lentivirus-mediated vector for RNA interference (RNAi) of Fas and establish a human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells (UC-MSCs) line with stable Fas gene silencing. Methods Four short