第一次课程－售果汁之还原糖定量dns法.ppt

第一次實驗課程－市售果汁之還原糖定量（DNS法） 實驗原理 3,5-dinitrosalicylic acid（DNS）試劑之反應是利用DNS具還原力之特性，因此碳水化合物只要具有游離或游離趨勢之醛或酮基，即能在鹼性溶液下有還原的能力而進行以下反應： 於一定範圍內，顏色的深淺強度和還原糖濃度成正比，故以標準葡萄糖檢量線來定量樣品中還原糖的比例。 Reduction 3,5-dinitrosalicylic acid 3-amino-5-nitrosalicylic acid （orange-red） （yellow） 實驗試劑 3,5-二硝基水楊酸溶液(3,5-dinitrosalicylic acid；DNS)： 3, 5-dinitrosalicylic acid 1 g 酒石酸鉀鈉(Potassium sodium tartrate) 30 g NaOH 1.6 g 溶於100 ml蒸餾水中並於水浴加熱使其溶解，最後置於棕色瓶 避光儲存備用。 Standard solution glucose standard solution (1000 μg /ml)：配置每ml含100、200、 400、800和1000 μg之葡萄糖溶液以製作葡萄糖之標準曲線。 glucose standard solution (ml) 0.5 1 2 4 5 H2O (ml) 4.5 4 3 1 0 Conc. (μg /mg) 100 200 400 800 1000 實驗步驟 （1）葡萄糖標準曲線 a. 取 5支試管分別加入0.5 ml葡萄糖標準溶液 及 0.5 ml DNS呈色劑。 b. 於100℃恆溫水浴加熱5分鐘後，置冷水浴 冷卻。 c. 加入3 ml蒸餾水，測 540 nm波長之吸光值。 d. 扣除空白值(以水取代葡萄糖溶液者)後，以吸 光值對葡萄糖量(μg)作圖可得一標準曲線圖。 （2）樣品之還原糖定量 將樣品溶液經過適當稀釋，使還原糖含 量落在校正曲線範圍內，依上述方法， 測定540 nm吸光值，由吸光值對照校 正曲線，換算樣品之還原糖含量。