医学论文-加味桔梗汤对 LPS 致急性肺损伤大鼠血清TNF -α、IL-1、IL-10 含量的影响.docVIP

医学论文-加味桔梗汤对 LPS 致急性肺损伤大鼠血清TNF -α、IL-1、IL-10 含量的影响 ?????????????????????作者：郑丰杰 李宇航 李丽娜 李鹏英 王庆国 【摘要】? 目的：观察 TNF -α、IL-1β、IL-10 内毒素（LPS）所致急性肺损伤（ALI）发病过程中的作用及加味桔梗汤治疗 ALI 的作用机制。方法：采用股静脉注射 LPS（5 mg/kg）建立大鼠 ALI 模型。采用 ELISA 法检测不同时相大鼠血清 中 TNF -α、IL-1β、IL-10 的含量，评价加味桔梗汤对其的影响。结果：LPS 诱发 ALI 过程中，大鼠血清 TNF -α、IL-1β及 IL-10 水平均显著高于正常组（P 0.01）；以加味桔梗汤保护的大鼠血清中 TNF -α、IL-1β及 IL-10 的含量均明显降低（P 0.01），且 IL-10 幅度最大。结论：TNF -α、IL-1β及 IL-10 在 LPS 诱导的 ALI 过程中起着重要作用；ALI 过程中，存在促炎/抗炎反应失衡，抗炎反应亢进；加味桔梗汤可以抑制 TNF -α、IL-1β及 IL-10 的释放，并抑制亢进的抗炎反应，对肺脏有一定的保护作用。 【关键词】? 急性肺损伤；加味桔梗汤；白介素 1；白介素 10；肿瘤坏死因子 ?? 内毒素脂多糖（LPS）作为革兰阴性菌的主要抗原性及致病性成分，具有广泛的生物活性，是一些炎症介质和细胞因子的强诱导剂。对内毒素致肺损伤机制的研究表明，其致伤作用主要在于它的始动作用，其诱发的炎性细胞因子对组织细胞的损害远远超过内毒素本身；故有学者将其作用形容为“扳机”而不是“子弹”作用。目前认为参与 ALI/ARDS 的炎症介质超过 40 种，其中最重要的也是研究最多的是促炎细胞因子（TNF -α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、IFN -γ等）和抗炎细胞因子（IL-10、IL-4、IL-13、TGF -β等）。由于这些炎症因子的多效性和相互作用，其调控机制十分复杂，单一抗炎策略很难奏效。因此，充分发挥中医复方的多成分、多环节作用特点，可能取得一定的突破。本实验通过检测各组大鼠血清中 TNF -α、IL-1β及 IL-10 这 3 种较有代表性的细胞因子的含量探讨加味桔梗汤治疗内毒素性肺损伤的机制。 ??? 1??? 材料与方法 ??? 1.1??? 实验材料 ??? 内毒素脂多糖（SIGMA；L2880）；电热恒温孵育箱；全波长酶标仪。 ??? 1.2??? 实验方法 ??? 1.2.1??? 动物分组及模型制作??? SD 大鼠（北京维通利华实验动物技术有限公司提供）雄性，体重（200±10）g，动物购来后适应性饲养 3 d，实验前禁食过夜，自由饮水；按随机数字表法随机分为 7组。 正常对照组（N 组，n = 9）：与其余各组同步饲养，每天灌服与 J 组相应量的生理盐水；造模当天，股静脉注射生理盐水（5 mg/kg）。 ALI 模型组（M 组，n = 27）：与其余各组同步饲养，每天灌服与 J 组相应量的生理盐水；造模当天，分别于股静脉注射 LPS[1]（5 mg/kg）后 2 h（M2 组）、4 h（M4 组）、6 h（M6 组）后腹主动脉取血处死，每组 9 只。 ??? 加味桔梗汤组（J 组，n = 27）：与其余各组同步饲养，提前灌服加味桔梗汤 6 d，造模当天分别于股静脉注射 LPS（5 mg/kg）后 2 h（J2 组）、4 h（J4 组）、6 h（J6 组）后，腹主动脉取血处死，每组 9 只。 ??? 1.2.2??? 血清 TNF -α、IL-1、IL-10 含量的检测??? TNF -α、IL-1、IL-10 ELISA 试剂盒购自北京晶美科技有限公司。腹主动脉取血，静置 4 h 后，离心分离血清，严格按试剂盒说明书操作。 ??? 1.3??? 统计学分析 ??? 实验数据采用统计软件 SPSS 11.5，所有数据均采用均数±标准差（x±s）表示，多组均数采用单因素方差分析，组间两两比较用 q 检验。 ??? 2??? 结??? 果 ??? 2.1??? 大鼠血清 TNF -α含量的测定 ??? 与正常组相比，2 h、4 h 时模型组大鼠血清中 TNF -α显著升高（P 0.01），2 h 时达到高峰；而后逐渐下降，在 6 h 时间点趋于正常，4 组间差异无显著性。与同时相模型组相比，J2、J4 组大鼠血清 TNF -α含量均显著降低（P 0.01）；6 h 时 4 组间差异无显著性（P 0.05），结果见表 1。 ??? 2.2??? 大鼠血清 IL-1β含量的测定 ??? 与正常组相比，各时相模型组大鼠血清中 IL-1β含量显著升高（P 0.01），2 h 时达到高