层析PPT.ppt

第八章;层析是根据混合物中，溶质在互不相溶的两相之间分配行为的差别，引起移动速度的不同而进行分离的方法 又称色谱法，层离法，层析法; 可用于生产规模，也可作为分析检测，控制产品的质量。;1903年，俄国植物学家Tswett提出色层分离法的概念 1931年，Kuhn和Lederr在氧化铝和碳酸钙柱体上，以制备规模分离胡罗卜素和叶黄素。 1938年，适用范围扩展到无色物质。 1940～1943年间，Tswett提出了前流分析和置换分析法。 50年代，气相色谱Martin和Synge，60年代，液相色谱 DNA重组技术的发展，制备色谱研究成为热点;㈡层析的发展历程;石油醚;色谱分离的规模： 色谱分析：10mg 半制备：10～50mg 制备：0.1～10g 工业生产：20g/d;分析色谱与制备及工业色谱的比较： 应用色谱技术范围不同：分析（柱，纸和薄板）；制备（柱） 操作上不同：分析（进样量越小越好，检测灵敏度越高越佳；制备（进样量越大越好，色谱柱适当大） 色谱分离理论不同： 理论塔板数的不同；分配系数不同；样品保留值与峰高的不同;原理： 层析是根据混合物中，溶质在互不相溶的两相之间分配行为的差别，引起移动速度的不同而进行分离的方法； 互不混溶的两相分别称为固定相和流动相； 料液中的溶质在固定相和流动相之间发生扩散传质，产生分配平衡，分配系数大的溶质随流动相移动的速度小。;;;;层 析分 类 ;层析分类 ;吸附色谱与其它色谱法的异同点 ;1. 流动相与固定相 根据流动相的相状态分气相层析法、液相层析法和超临界流体层析法 ； 固定相为液体的分配层析法、固定相为固体的吸附层析法以及固定相为固定于固体表面的液体薄层(以固体为载体)的分配层析法等。 ;2. 固定相的形状 根据固定相或层析装置形状的不同，液相层析法又分纸层析法、薄层层析法和柱层析法 纸层析和薄层层析多用于分析目的，而柱层析易于放大，适用于大量制备分离，是主要的层析分离手段。 ;3. 压力 在以固体为固定相的液相柱层析中，根据操作压力的不同，分为低压(压力一般小于0.5MPa)、中压(压力为0.5～4.OMPa)和高压(压力为 4.0～40MPa)液相层析法； 高压液相层析法中层析介质(固定相)微细，分离精度高、速度快，主要用于成分分析。大量制备分离常用低压或中压液相层析法。;4.流动相的流动方向 轴向流层析； 径向流层析：溶质在半径方向上得到分离，优点是规模放大时，半径不变，通过增加柱高提高处理能力，且压降不会增加，适于大规模；但造价高。;5.分离操作方式 洗脱展开 (elution development) 迎头分析 (front analysis) 顶替展开 (Elution chromatography) ;层 析 分 类 ;层 析 分 类 ;浓度梯度制造器;;5.分离操作方式：迎头分析 又称前流，前沿分析法，将待分离的混合物不断输入柱中，让它一直流下去，直到过程结束。亲和力小的先流出，一般不能达到组分的分离，只有作用力最弱的组分为纯品。适于除痕量杂质，组分浓度不会被稀释。;5.分离操作方式 :顶替展开 又称置换，排代展开，利用一种与固定相作用力极强的置换剂作流动相，去替代结合在固定相表面的溶质分子。优点是浓缩，单位柱长固定相的利用率最高。但各组分一个连一个的流出，界线不明，分离不理想；合适的置换剂不易找到。;6.分配机理 凝胶过滤层析、离子交换层析、反相层析；疏水性相互作用层析和亲和层析等。;基本概念 ;基本概念 ;基本概念 ;基本概念 ;基本概念 ;分 离 度 ;柱色谱系统的组成 ;柱式层析系统的组成基本相似。由以下几个部分构成： A 蠕动泵 B 层析柱 C 装柱 D 加试样 E 洗脱 F 检测器 G 部分收集器;柱层析装置图;柱层析的基本操作 ;实验室用的层析柱;;柱层析的基本操作 ;柱层析的基本操作 ;柱层析的基本操作 ;柱层析的基本操作 ;柱层析的基本操作 ;层析过程理论基础 ;原理与操作 凝胶过滤介质 影响分离特性的因素 应用 特点 ;凝胶层析（gel chromatography）又称为凝胶排阻层析（gel exclusion chromatography）、分子筛层析（molecular sieve chromatography）、凝胶过滤（gel filtration）、凝胶渗透层析（gel permeation chromatography）等。 ;原理与操作;;原理与操作;凝胶过滤介质;凝胶过滤介质;凝胶过滤介质;;凝胶过滤操作;影响分离特性的因素;线速度;影响分离特性的因素;影响分离特性的因素;应 用;凝胶过滤特点;GFC的不足之处在于 ： 仅根据溶质之间分子量的差别进行分离，选择性