紫外 可见分光光度法PPT.pptVIP

Ix dIx dIx Ix 吸收光强 入射光强 吸收率 任一截面的吸收率 dx a dn ds = adn 截面为S的区域内俘获光的有效面积 从分子吸收的角度考虑 因此俘获光的几率应为： a1 dn1 dn2 dn3 a3 a2 ds = a1dn1+a2dn2+a3dn3 -dIx/Ix=dS/S (1) (2) (3) 由吸光度定义： 对于单一组分： 若浓度以重量浓度表示： 偏离 L-B 定律的因素 样品吸光度 A 与光程 b 总是成正比。但当 b 一定时，A 与 c 并不总是成正比，即偏离 L-B 定律！这种偏离由样品性质和仪器决定。 1. 样品性质影响 a）待测物高浓度--吸收质点间隔变小—质点间相互作用—对特定辐射 的吸收能力发生变化---? 变化； b）试液中各组份的相互作用，如缔合、离解、光化反应、异构化、配 体数目改变等，会引起待测组份吸收曲线的变化； c）溶剂的影响：对待测物生色团吸收峰强度及位置产生影响； d）胶体、乳状液或悬浮液对光的散射损失。 ?x ?i ? Ax Ai 2. 仪器因素 仪器因素包括光源稳定性以及入射光的单色性等。 a）入射光的非单色性：不同光对所产生的吸收不同，可导致测定偏差。 假设入射光由测量波长?x和干扰?i波长组成，据Beer定律，溶液对在?x和?i 的光的吸光度分别为： 当两种波长同时存在时， ? 当?x=?i时，或者说当?x=?i时，有A=?xbc, 符合L-B定律； ? 当?x??i时，或者说当?x??i时，则吸光度与浓度是非线性的。二者差别越大， 则偏离L-B越大； ? 当?x?i，测得的吸光度比在“单色光” ?x处测得的低，产生负偏离；反之，当 ?x?i，则产生正偏离。 A C 0 ?1 ?1 + ?2 特别是存在非吸收线(或吸收很小,杂散光)和浓度较大时，I变的 很小， I i b）谱带宽度与狭缝宽度：“单色光”仅是理想情况，经分光元件色散所得的“单色光”实际上是有一定波长范围的光谱带(即谱带宽度)。单色光的“纯度”与狭缝宽度有关，狭缝越窄，它所包含的波长范围越小，单色性越好。 紫外-可见吸收光谱的灵敏度 ? = 0.4343 N ai ai = 1x10-15 cm2 N = 6.02x 1023 因为 ? 为摩尔吸光系数 ai 的单位是 cm2 （cm3 是 ml,变成L除1000） 所以 ? = 0.4343 N ai = 0.4343 x 6.02x 1023 x 1x10-15/ 1000 = 105 若1%吸收 A=0.0044 b = 1 C= A 0.0044 ?b 100000 = = 4.4 x 10-8 (M) 此即为方法的理论灵敏度 思考题 UV-VIS的理论灵敏度为 4.4 x 10-8 M，这一极限值能够从哪几个方面突破？请你提出有效的方法。 光源 单色器 狭 缝 样品室 检测器 四、 紫外-可见光度计 紫外-可见光度计仪器由光源、单色器、吸收池和检测器四部分组成。 光源 对光源基本要求：足够光强、稳定、连续辐射且强度随波长变化小。 1. 钨及碘钨灯：340~2500 nm，多用在可见光区； 2. 氢灯和氘灯：160~375nm，多用在紫外区。 100 400 800 ? 山 气灯 钨丝灯 相对辐射功率 D2 灯 H2 灯 200 250 300 ?/nm 相对辐射功率 单色器(Mnochromator) 在UV-Vis光度计中，单色器通常置于吸收池的前面！（可防止强光照射引起吸收池中一些物质的分解） 通常由入射狭缝、准直镜、色散元件、物镜和出射狭缝组成 吸收池(Cell，Container)： 用于盛放样品。可用石英或玻璃两种材料制作，前者适于紫外区和可见光区；后者只适于可见光区。有些透明有机玻璃亦可用作吸收池。 检测器： 硒光电池、光电倍增管、二极管阵列检测器 1 cm 5 cm 石英 —— 玻璃 2.紫外-可见光度计工作原理 分光光度计分为单波长和双波长仪器。 1. 单波长分光光度计 单光束 双光束 特点： 双光束方法因光束几乎同时通过样品池和参比池，因此可消除光源不稳产生的误差。 光源 检测器 单色器 单色器 切光器 吸收池 双波长分光光度计示意图 2. 双波长分光度计 通过切光器使两束不同波长的光交替通过吸收池，测得吸光度差?A。 ?AB1和?AB2分别为在?1和?2处的背