细胞生物学实验PPT.ppt

本实验的主要内容 实验目的 实验用品 实验方法 培养基的配制 　一、培养基的制备 　二、培养基的分装 　三、培养基的灭菌 　取材、消毒与接种 　一、取材与消毒 　二、接种 　三、培养与观察 作业 ①通过对培养基的配制、植物外植体的杀菌消毒、无菌接种、培养，熟练掌握植物组织培养的基本技术； ②通过对植物组织培养技术的理论学习与实验操作，全面认识借用无菌操作方法，培养植物的离体器官、组织或细胞，使其在人工合成的培养基上，通过细胞分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整再生植株的过程－即植物的全能性。 ③通过在超净工作台上进行无菌操作训练，使学生初步掌握组织培养的无菌操作技术。 二、实验用品 　材料 　①事先一天浸泡的小麦　②新鲜的植物叶片 　仪器 　高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养箱。 　用具 　镊子、解剖刀、剪刀、接种针、铝饭盒、锡泊纸、记号笔 　 橡皮筋、酒精灯、火柴 、酒精棉花球。 　玻璃器皿 试剂瓶（50mL、100mL、1000mL） 　三角瓶（100mL） 　刻度吸管（0.5mL、1mL、5mL、 10mL） 　培养皿（直径9~11cm） 　试剂与培养基 70%酒精　95%酒精 0.1%升汞 无菌双蒸水 盛有培养基的培养瓶(已灭菌) 一、MS培养基的配制、分装与灭菌 　1、大量元素　　　 3、铁盐 2、微量元素　　　4、有机物质 二、取材、消毒与接种 三、培养与观察 　　 上周已完成 一、培养基的配制、消毒与分装 100倍微量元素母液(10ml) 10倍大量元素母液(100ml) 调节pH到5.8 100倍铁盐母液(10ml) 培养基 100倍有机物质母液(10ml) 定容到1000ml 生长素(500μL) 蔗糖(30g) 加入琼脂条8g溶解 分装（每瓶40ml) 高压灭菌 二、取材、消毒和接种 在接种前4h用甲醛与高锰酸钾混合薰蒸接种室，并打开紫外灯照射30min； 正式接种前30min左右，打开超净工作台上的紫外灯和风机，20～30min后接种； 用自来水冲洗干净刚剪下的幼嫩的叶片，置于带塞磨口三角瓶中（在进入接种室室，应用70%酒精擦拭瓶外）。 用肥皂水洗净双手，在缓冲间内穿好灭过菌的实验服、帽子与拖鞋，戴好口罩，进入接种室； （一）　实验前的准备工作 二、取材、消毒和接种 用75％的酒精擦拭工作台面和双手； 用蘸有70％酒精的纱布擦拭装有培养基的培养器皿，放进工作台； 把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95％酒精中，在火焰上灭菌后，放在器械架上； 二、取材、消毒和接种 在超净工作台内，把植物叶片放进75％酒精的培养皿中浸泡约30s，轻轻摇动15-30s，倒出酒精。 加入0.1%升汞液，浸泡消毒5～10min，浸泡时可进行搅动，使植物材料与灭菌剂有良好的接触 。 倒出升汞液，用无菌水换3～5次，彻底清除残留叶面和瓶内的升汞液。 用镊子把叶子夹入培养皿的吸水纸上，吸干水珠，把叶子切成3×5mm大的小片。 （二）　接种全过程 取下接种器械，在火焰上灭菌。 取已灭菌的培养基瓶，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到，打开封口棉塞。 把叶片迅速放入培养瓶，用接种针拨匀，塞上棉塞，扎上橡皮筋。 用记号笔在瓶壁上写明培养材料、培养基代号，标明接种日期、培养者姓名。 二、取材、消毒和接种 接种完毕后取出培养瓶，置26-28℃恒温培养室内，照光条件下培养，定期进行观察。 三、培养与观察 外植体消毒、培养室、超净台和操作者自身消毒是防止细菌污染的关键； 放入培养瓶和接种用具（包括镊子、解剖刀、接种针须事前放入铝饭盒，经150~160℃烘箱干热灭菌2-3小h）。在超净台中，预先置于95%酒精中。 每一步操作如取接种工具、培养瓶等，均在点燃的酒精灯上进行消毒。 在无菌操作过程中，切记把吸取溶液的枪头、枪和吸管直接放在超净台上，造成二次污染。 在无菌操作过程中，不准打手机，也不准大声说话。 接种结束后，清理和关闭超净工作台。 1、根据枸杞叶片培养过程中所看到的结果，你认为2，4-D、6-BA和NAA对于形态发生过程各有何种影响？ 2、人工条件与植物离体器官、组织或细胞，经过分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整植株的过程，能够说明什么问题？ 实验六 孚尔根（ Feulgen）染色法 任课教师 查向东 一、实验目的 学习掌握Feulgen染色方法，鉴定蚕豆根尖细胞（或其它细胞）核内染色质或染色体上DNA的存在。 二、实验原理 细胞中的DNA受1N HCl，60℃水解作用以后，核酸中的嘌呤碱很快完全被除掉，使脱氧核糖中潜在的醛基获得自由状态。水解后，组织经水漂洗，再移至希夫(Sch