第七章节 酶的非水相催化.ppt

第七章 酶的非水相催化 第一节 非水介质中酶学基础 1984年美国KlibanovA．M．在《科学》上发表了一篇关于酶在有机介质中催化条件和特点的综述。他们在仅含微量水的有机介质(mmroaqueous media)中成功地酶促合成了酯、肽、手性醇等许多有机化合物。 他明确指出，只要条件合适，酶可以在非生物体系的疏水介质中催化天然或非天然的疏水性底物和产物的转化，酶不仅可以在水与有机溶剂互溶体系，也可以在水与有机溶剂组成的双液相体系，甚至在仅含微量水或几乎无水的有机溶剂中表现出催化活性，这无疑是对酶只能在水溶液中起作用这一传统酶学思想的挑战。 早在20世纪初，Bourquelot E．等曾经将乙醇、丙酮类的有机溶剂加到酶的水溶液中，进行非水介质中酶催化的尝试，在这种情况下，需要保持很高的含水量，酶才具有一定的催化活性，但是比水溶液中的酶活力低许多。 在有机溶剂是酶的变性剂、失活剂这一传统酶学思想的影响下，酶在有机介质中催化作用的研究在半个世纪内几乎毫无进展。 1966年以来Dostoli F．R．和SiegelS．M．分别报道过胰凝乳蛋白酶和辣根过氧化物酶在几种非极性有机溶剂中具有催化活力。 1975年至1983年间BucklandB．C．和MartinekK．等做了将微生物细胞、游离酶和固定化酶用于有机溶剂中合成酯和类固醇及甾醇转化的探索。这20年间非水溶剂中酶催化的研究虽然已起步，但是发展却十分缓慢。 直到1984年，非水溶剂中酶催化的研究才取得了突破性的进展。 此后十几年来，酶在非水介质中催化反应的研究十分活跃。 现已报道，酯酶、脂肪酶、蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶等水解酶类；过氧化物酶、过氧化氢酶、醇脱氢酶、胆固醇氧化酶、多酚氧化酶、多细胞色素氧化酶等氧化还原酶类和醛缩酶等转移酶类中的十几种酶在适宜的有机溶剂中具有与水溶液中可比的催化活性。 Kieboom对是否所有的酶都适于非水溶剂中的催化进行了深入的讨论。 酶在非水介质中，由于酶处于一种与水极不相同的环境，不可避免地导致酶存在状态与酶结构的改变，在水相中建立起来的酶反应动力学及反应机制都不能直接应用于非水介质中。 用于酶催化的非水介质包括①含微量水的有机溶剂；②与水混溶的有机溶剂和水形成的均一体系；③水与有机溶剂形成的两相或多相体系；④胶束与反胶束体系；⑤超临界流体；⑥气相；⑦离子液。它们不同于标准的水溶液体系，在这些体系中水含量受到不同程度的严格控制，因此又称为非常规介质(nonoonventional medis)。 1984年以来酶在非水介质中的结构特点，催化条件和催化机理的研究不断深入和系统，与此相关的综合评述已超过前20年总和的5倍多。 非水酶学的研究主要集中在3个方面：第一，非水酶学基本理论的研究，它包括影响非水介质中酶催化的主要因素以及非水介质中酶学性质；第二，通过对酶在非水介质中结构与功能的研究，阐明非水介质中酶的催化机制，建立和完善非水酶学的基本理论；第三，利用上述理论来指导非水介质中酶催化反应的应用。 目前，超临界流体和气体与有机溶剂相比还没有广泛地用于酶催化。 因此，本章主要介绍酶在以有机溶剂为主体的微水有机溶剂中和反相胶束中的酶结构与性质、动力学和热力学、酶催化的条件和反应机制以及酶活性和选择性的调节。 一、非水介质中酶的结构 传统酶学中，酶分子是在水溶液中存在，除固定化酶外，酶分子是均一地溶解于水溶液中。 在有机溶剂中，酶分子不能直接溶于其中，它的存在状态有多种形式，主要分为两大类。 第一类为固态酶，它包括冷冻干燥的酶粉或固定化酶，它们以固体形式存在有机溶剂中。最近还有利用结晶酶进行非水介质中催化反应和酶结构的研究，结晶酶的结构更接近于水溶液中酶的结构，它的催化效率也远高于其他类型的固态酶。结晶酶在非水介质中的行为不久可能会成为非水酶学研究的热点之一。 第二类为可溶解酶，它主要包括水溶性大分子共价修饰酶和非共价修饰的高分子—酶复合物、表面活性剂—酶复合物以及微乳液中的酶等。 酶不溶于疏水性有机溶剂，它在含微量水的有机溶剂中以悬浮状态起催化作用(图7-1)。按照热力学原理预测，球状蛋白质的构象在水溶液中是稳定的，在疏水环境中是不稳定的。 但是，近些年大量实验结果表明，酶悬浮于苯、环己烷等疏水有机溶剂中不变性，而且还能表现出催化活性。 为什么酶在有机溶剂中能表现出催化活性?许多学者对酶在水相与有机相的结构进行了比较，他们的实验证实了在有机相中酶能够保持其整体结构的完整性，有机溶剂中酶的结构至少是酶活性部位的结构与水溶液中的结构是相同的。 酶在有机溶剂中结构的直接信息是从蛋白质在有机溶剂中