第二章节 氨基酸.ppt

生 物 化 学;主要参考资料：;Voice: 6571620 (Home) 6511613 (Office) E-mail: jichengp@mails.tsinghua.edu.cn ;第二章 氨基酸与蛋 白质的一级结构;（一）氨基酸的结构共性;;氨基酸1;（二）、氨基酸侧链的性质与分类;组成蛋白质的20种常见氨基酸可以按R基的化学结构或极性大小进行分类。 按R基的化学结构20种常见氨基酸可分为具非极性侧链的氨基酸、侧链具极性但不带电荷的氨基酸和侧链带电荷的氨基酸等3类，其中以具非极性侧链的氨基酸最多。;1 、具非极性侧链的氨基酸;2.侧链具极性但不带电荷的氨基酸;在氧化条件下，两个半胱氨酸的侧链巯基形成一个二硫键：氧化的产物为胱氨酸。;3. 侧链带电荷的氨基酸;;;（三）氨基酸名称的缩写符号;二.“非标准”氨基酸;三、氨基酸的旋光性和构型;;;在蛋白质分子中存在L－胱氨酸。;=; 由于旋光活性分子能使偏振光平面发生旋转方向和旋转角度都是可以测定的。用旋光仪可以定量地测定这类分子地旋光活性：;;（一）氨基酸的两性电离性质;根据酸碱质子理论，氨基酸在水中的偶极离子既起酸（质子供体）的作用：;氨基酸的α－氨基， α－羧基以及侧链可解离的基团都有一个特征性的电离（或称解离）常数的负对数值（pK）。 由于氨基酸的每个可解离基团的电离趋势不同，因而不同氨基酸有不同的pK。 pK值可通过氨基酸的酸碱滴定的酸碱滴定曲线来测定。每个可滴定基团的pK相应于氨基酸滴定曲线中的该基团滴定过程的中点。;H;第一步解离： ;氨基酸的解离常数可用测定滴定曲线的实验方法得到。滴定可从甘氨酸（或等点电甘氨酸）溶液、甘氨酸盐酸盐或甘氨酸钠溶液开始。当0.1 mol甘氨酸溶于水时，溶液的pH约等于6.0。 用标准NaOH溶液滴定，以加入的NaOH的摩尔数对pH作图，测得滴定曲线B段，在pH 9.60处有一个拐点。 用标准HCl滴定，以加入的HCl的摩尔数对pH作图，测得滴定曲线A段，在pH 2.34处有一个拐点。;Handerson-Hasselbalch公式;甘氨酸的滴定曲线（解离曲线）;等电点：;侧链不含离解基团的中性氨基酸，其等电点是它的pK′1和pK′2的算术平均值：pI = (pK′1 + pK′2 )/2 同样，对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其pI值也决定于两性离子两边的pK′值的算术平均值。 酸性氨基酸：pI = (pK′1 + pK′R-COO- )/2 碱性氨基酸：pI = (pK′2 + pK′R-NH2 )/2 ;;;;;构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区(220nm)均有光吸收。 在近紫外区(200-400nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。 酪氨酸的?max＝275nm，?275=1.4x103; 苯丙氨酸的?max＝257nm，?257=2.0x102; 色氨酸的?max＝280nm，?280=5.6x103; ;;;ε;第二节 氨基酸分离和分析;分离纯化氨基酸的方法很多。 纸层析法曾经是分离、分析氨基酸的一种重要的方法。但是难以准确、定量和有效的分离； 氨基酸电泳分离； 氨基酸离子交换层析法。 ;电泳：带电荷颗粒在电场中的移动。 氨基酸是两性离子化合物，可以电离带不同的电荷。当把氨基酸混合物点在用一定pH缓冲液浸湿的滤纸条上时，混合物中的各组分能根据它们所带净电荷的种类和净电荷的多寡，在电场中以不同的速度向不同方向泳动，从而把它们分开。 带电颗粒在电场中泳动的速度叫做电泳迁移率（用符号μ表示）。;μ＝（q/πηγ2)·V q －分子的静电荷； γ－分子半径，以cm计； η－电泳发生时，液体介质的粘度； V－使用的电压。 ;除滤纸外，可作为电泳固体支持物的还有： 淀粉 醋酸纤维素薄膜 广泛应用于临床上的血液蛋白质分析。 琼脂糖 聚丙烯酰胺凝胶。 在蛋白质和核酸的分析中广泛应用。; ; ; ;茚三酮反应：在弱酸溶液中与氨基酸一起加热，氨基酸被氧化，脱去氨基和羧基，生成相应的醛，茚三酮本身则被还原成还原性的茚三酮，后者再与另一分子的茚三酮和氨作用生成蓝紫色物质。 在分析仪中，茚三酮与被洗脱的氨基酸混合并加热到100℃，每个吸收峰（它的大小与氨基酸的浓度成正比）可用分光光度法检测出来。这个方法可检测到几个毫摩尔的氨基酸。 除脯氨酸外，其他所有氨基酸都能与茚三酮反应生成蓝紫色化合物。脯氨酸与茚三酮反应后生成黄色化合物。 使用荧光试剂进行荧光检测则可使分析的灵敏度提高。;第三节 肽;氨基酸1;二. 肽的性质;三. 生物活性肽;还原型谷胱甘肽（GSH）