大蒜蒜氨酸酶基因克隆与序列分析及毕赤酵母表达质粒的构建 Cloning and Sequence Analysis of Alliinase Gene from Garlic and Construction of Pichia pastoris Expression Plasmid.pdfVIP

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2018-01-30 发布于上海
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大蒜蒜氨酸酶基因克隆与序列分析及毕赤酵母表达质粒的构建 Cloning and Sequence Analysis of Alliinase Gene from Garlic and Construction of Pichia pastoris Expression Plasmid.pdf

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大蒜蒜氨酸酶基因克隆与序列分析及毕赤酵母表达质粒的构建 Cloning and Sequence Analysis of Alliinase Gene from Garlic and Construction of Pichia pastoris Expression Plasmid

吉林农业大学学报2010，32(3)：258—263，283 JournalJilin of AgriculturalUniversity 大蒜蒜氨酸酶基因克隆与序列分析及毕赤酵母表达质粒的构建。吴晓莉r，许健1，张婷1，贾平2，周云凯1 1．浙江中医药大学生命科学学院，杭州310053；2．浙江省人民医院，杭州310014 摘扩增蒜氨酸酶基因，获得了长度为l523 酶)。利用生物信息学相关软件对该序列进行同源性比较、进化分析、蛋白质的结构和酶活性中心预测，引用 pPICZaC载体构建蒜氨酸酶毕赤酵母真核表达重组质粒。结果表明：浙江蒜氨酸酶与其他葱属植物如大蒜、洋葱、冬葱、火葱和细香葱蒜氨酸酶具有高度同源性，进化关系比较接近，目的基因可以成功构建到毕赤酵母表达载体。浙江蒜氨酸酶三维结构呈树枝状，蛋白质分子的N端含有一个类似表皮生长因子结构域，酶的中心含一个天冬氨酸氨基转移酶超家族结构域；蛋白质结构中Lyw277可能是磷酸吡哆醛的结合位点，Ly＆．277 周围区域可能是酶活性中心部位。重组质粒经鉴定构建正确。关键词：蒜氨酸酶；大蒜；克隆；序列分析；毕赤酵母中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1000．5684(2010)03．0258．06 and ofAlliinaseGenefromGarlicandCon- CloningSequenceAnalysis structionofPichia Plasmid pastorisExpression WU Yun—kail Xiao～li，XUJianl，ZHANGTin91，JIAPin92，ZHOU ChineseMedical 3 1．CollegeofLifeScience，Zhejiang University，Hangzhou Provincial7S 3 People 10014，China Hospital，Hangzhou Abstract：Primerswere basedonthe ofalliinase($73324)inGenBank．The designed reported sequences from bulb reverse eDNA alliinase Wasextracted geneencoding protein Zhejianggarlic by transcription about1 523 DNA chainreaction(RT—PCR)．PCRWas polymerase product bp segment．Thesequence WassubmittedtoGenBank(accessionnumber：FJ786257)，namedalliinase(zJalliinase)．ZJ Zhejiang alliinaseWas withtheotheralliinases in of and homologyevolution，the compared