桦褐孔菌漆酶基因片段的克隆与序列分析 Cloning and Sequence Analysis of Laccase Gene Fragments from Strains of Inonotus obliquus.pdfVIP

吉林农业大学学报　 ２０１４，３６（５）：５５８～５６３ ｈｔｔｐ：／ ／ ｘｕｅｂａｏ．ｊｌａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｊｌｎｄｘｂ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ 桦褐孔菌漆酶基因片段的克隆与序列分析∗ 尹勇刚，隋飞飞，陈艳秋∗∗ 延边大学长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室，延吉１３３００２ 摘　 要：通过简并引物克隆得到了桦褐孔菌及同属真菌共１１个菌株的漆酶基因片段，并对其结构与同源性 进行了分析。 结果表明：１１个目的扩增产物均含有２ 个内含子，且内含子位置保守，推导的氨基酸序列中均 包含有保守的铜离子结合位点；ＤＮＡ序列与氨基酸序列的相似度都颇高，基于２ 类序列构建的ＮＪ 系统进化 树均能将除俄罗斯采集的桦褐孔菌菌株外归为１组，该漆酶基因片段可用于鉴定桦褐孔菌。 关键词：桦褐孔菌；漆酶；基因结构；序列分析 中图分类号：Ｑ７８５；Ｑ９４９．３２９　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 文章编号：１０００⁃５６８４（２０１４）０５⁃０５５８⁃０６ ＤＯＩ：１０．１３３２７／ ｊ．ｊｊｌａｕ．２０１４．２０３１ 引文格式：尹勇刚，隋飞飞，陈艳秋．桦褐孔菌漆酶基因片段的克隆与序列分析［Ｊ］．吉林农业大学学报，２０１４， ３６（５）：５５８⁃５６３． Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｌａｃｃａｓｅ Ｇｅｎｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｆｒｏｍ Ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆＩｎｏｎｏｔｕｓ ｏｂｌｉｑｕｕｓ ＹＩＮＹｏｎｇ⁃ｇａｎｇ，ＳＵＩ Ｆｅｉ⁃ｆｅｉ，ＣＨＥＮＹａｎ⁃ｑｉｕ Ｙａｎｂｉａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｎａｔｕｒａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ Ｃｈａｎｇｂａｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎ ＆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅ⁃ ｃｕｌｅｓ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｙａｎｊｉ １３３００２，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｌａｃｃａｓｅ ｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｓｏｆ １１ｓｔｒａｉｎｓｏｆＩｎｏｎｏｔｕｓ ｏｂｌｉｑｕｕｓ ａｎｄ ｓｅｖｅｒａｌ ｏｔｈｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｇｅｎｕｓｗｅｒｅ ｃｌｏｎｅｄｂｙ ｕｓｉｎｇ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅｐｒｉｍｅｒｓ，ａｎｄ ｉｔｓｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄｈｏｍｏｌｏｇｙ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ａｎａ⁃ ｌｙｚｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｗｏ ｉｎｔｒｏｎｓ，ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ，ｗｅｒｅ － ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｉｎ ａｌｌ １１ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓ，ａｎｄ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｃｏｐｐｅｒ⁃ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ （Ｈｉｓ）ｗｅｒｅ ｓｈｏｗｎ ｉｎ ｔｈｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ． Ｈｉｇｈ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｒｅｖｅｌｅｄ ｉｎ ｂｏｔｈ ＤＮＡ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ＮＪ ｔｒｅｅｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｔｈａｔ ａｌｌＩ． ｏｂｌｉｑｕｕｓ ｓｔｒａｉｎｓ ｅｘｐｅｃｔ Ｃｈａｇａｗｅｒｅ ｇｒｏｕｐｅｄ ｔｏｇｅｔｈｅｒ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈｉｓｌａｃｃａｓｅ ｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉ． ｏｂｌｉｑｕｕｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｉｎｏｎｏｔｕｓ ｏｂｌｉｑｕｕｓ；ｌａｃｃａｓｅ；ｇｅｎｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ；ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ