加巴喷丁对大鼠背根神经节高电压激活钙电流的影响.pdfVIP

《加巴喷丁对大鼠背根神经节高电压激活钙电流的影响》 陈晓东 徐州医学院麻醉学院 摘 要 目的：观察加巴喷丁（GBP）对神经病理性疼痛模型大鼠的背根神经节神经元高电压激活（HVA）钙电 流（ICa）的影响，探讨其对神经病理性疼痛作用的机制。 方法：SD雄性大鼠采用背根神经节结扎术（SNL）造成神经病理性疼痛模型，酶消化法急性分离背根神经节 （DRG）神经元，采用全细胞膜片钳技术记录神经元的高电压激活（HVA）钙电流。 结果：GBP呈浓度依赖性抑制DRG神经元钙电流，半数效应浓度（EC50）为1.74μmol/L。加入10μmol/L GBP后，ICa峰值降低，稳态激活曲线和稳态失活曲线均向超极化方向移动。加入N型钙通道阻断剂ω-Conotoxins MVIIA后，GBP的作用明显减小。 结论：GBP能够抑制大鼠DRG神经元HVA钙电流，N型钙通道可能是其作用的主要靶点。 加巴喷丁；神经病理性疼痛；背根神经节；膜片钳；钙电流 【关键词】 [Abstracts] Objective: root ganglion(DRG) neurons of neuropathic rats. METHOD: patch clamp. RESULTS: CONCLUSION: [Keywords] ganglia; patch-clamp; calcium cuurent Gabapentin; neuropathic pain;dorsal root 引 言 加巴喷丁作为一种有效的抗惊厥药物，同时也有明显的镇痛作用，然而其具体的机制仍未明确。电压 门控钙通道（VGCC）在与神经病理性疼痛相联系的神经元敏化 过程的发生和维持中起关键作用，为抗痛觉过敏药物的发展提供了有力的靶点[1] 。背根神经节（DRG） 在痛觉的传导过程中起着关键作用[2] ，其上表达有不同高电压激活钙通道的α1亚基[3] [4] 。在痛觉过敏大鼠 模型或者新生对照大鼠脊髓切片的背根神经元上已经证实存在加巴喷丁作用的一个突触前位点[5][6] ，突触前 钙电流参于了伤害性突触递质的释放，这一特点可能是加巴喷丁抗痛觉过敏的作用机制。本研究拟通过观 13 察加巴喷丁（GBP）对神经病理性疼痛模型大鼠的DRG神经元钙通道的影响，探讨其作用机制。 材料与方法 Collagenase（type I），Trypsin（type I），KCl，Mg-ATP，Trisbase，Li-GTP，EGTA，HEPES，TEA-Cl，Gabapentin， ω-Conotoxins MVIIA（Sigma公司，美国）；DMEM（High Glucose）（GIBCO，美国）；其余均为国产分析纯。 DMEM培养 液（g/L）：DMEM 13.4，NaHCO3 3.7，pH值7.2，4℃保存；细胞外液（mmol/L）：TEA-Cl 145,MgCl2 0.8，CaCl2 5，HEPES 20，D-glucose 10，用Trisbase调pH至7.3，4℃保存；电极内液（mmol/L）：CsCl 135，MgCl2 2，EGTA 11，CaCl2 1, HEPES 20，Mg-ATP 5，Li-GTP 0.4,用Trisbase调pH至7.3，用孔径为0.22 μm的滤膜过滤，-20℃保存。 健康成年清洁级Sprague-Dawley雄性大鼠，10～12周龄，江苏省实验动物中心提供。按参考文献所提 供的方法建立动物模型。模型稳定2周后开始膜片钳实验。大鼠麻醉后断头，迅速取L5段脊柱，放入0℃ 预先充好氧气的DMEM培养液中。分离出背根神经节，用培养液清洗3～4遍。把神经节放入Collagenase（I 型，4mg/1.5ml）和Trypsin（I型，1.5mg/1.5ml）中，36.5℃孵育23～25分钟。细胞外液清洗细胞5～6遍 以终止酶的消化。用不同口径的吹打管轻轻吹打细胞，制成细胞悬液。把细胞悬液滴入35mm的培养皿中， 细胞贴壁2h后开始膜片钳实验。 应用全细胞膜片钳技术记录神经元Ca++ 电流。实验选用胞膜清晰、表面光洁的中等大小（30-40μm） 的DRG神经元。记录用微电极由玻璃毛细管