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项目7　药物体外抗菌试验技术 模块1 必备知识——药物的体外抗菌试验 主要用于筛选抗菌药物或测定细菌对药物的敏感性，又称药敏试验。 体外抗菌试验包括抑菌和杀菌两个方面。 （一）体外抑菌试验 体外抑菌试验是最常用的抗菌试验，常用的方法主要有琼脂扩散法和系列稀释法。 １.连续稀释法 1)液体培养基连续稀释法 2)固体培养基连续稀释法: 平板法、斜面法 ２.琼脂扩散法 1）滤纸片法 2）挖沟法 3）管碟法 4）打孔法 最小抑菌浓度(MIC) ：MIC是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度。通常用MIC评价药物抑菌作用的效力，以μg/ml或U/ml表示。其值越小，说明抑菌作用愈强。 (二)体外杀菌试验 用途：评价药物对微生物的致死活性 1．最小杀菌浓度的测定 　　是取MIC终点以上未长菌的各管培养液，分别取出并移种于无菌平板上，培养后凡平板上无菌生长的药物最低浓度，即为该药物的MBC。对微生物广义而言，也可称之为最小致死浓度 (MLC)。某药物能杀死微生物的最低浓度。 2．活菌计数法 　　在—定浓度的定量药物内，加入—定量的试验菌，作用—定时间后取样稀释，再取—定量的此稀释液混入未凝固的琼脂培养基中，立即倾注成平板，培养后计算菌落数。由于每个菌落是由—个菌细胞繁殖而来，则菌落数或菌落形成单位CFU)乘以稀释倍数，再除以稀释液用量，即得该药物与试验菌的混合液中每毫升内存活的细菌数或CFU，从而可算出该药物对细菌的致死率。 3．酚系数测定 　　　是用来测定消毒剂效力的一种指标，是以石炭酸为标准，在相同的实验条件下，将消毒剂和石炭酸的杀菌力作比较，所得的杀菌效力的比值，石炭酸系数≥2为合格。 （三）联合抗菌试验法 　　　同时应用两种抗菌药物时，两种药物之间既可能产生相互影响，也可能彼此不影响；产生影响时，既可能是相互加强(协同作用)，或两药作用出现累加现象(即两药作用之和)也可能是相互减弱(拮抗作用)，要确定两种药物之间的作用关系时，通常需用联合抗菌试验法。 最简便、最常用的方法：纸条或纸片试验法。 二、药物的体内抗菌试验 　　　体外抗菌试验有效的药物，还需要经过体内抗菌试验证明有效后，才能推荐应用于临床。 　　　体内抗菌试验即动物的实验治疗或保护力试验。动物实验治疗的方法，大致是先用致病菌使动物体表或体内感染，造成感染动物模型，然后按不同剂量、不同给药方法(如腹腔注射、皮下注射、肌肉注射或口服等)以及间隔不同时间进行实验治疗。实验时还要设立一组动物用生理盐水代替药物进行对照治疗。然后根据实验组与对照组的动物死亡数或内脏的含菌数，评价药物的作用和效力。 三、抗菌试验的影响因素 　　　在抗菌试验中应有效控制其影响因素，才能确保试验的科学性和准确性，主要的影响因素有： ①试验菌 ②培养基 ③供试药物 ④对照试验 第二节　灭菌制剂的无菌检查 无菌检查的基本原则 严格进行无菌操作 正确进行样品采集 无菌检查用培养基 需氧菌、厌氧菌培养基：硫乙醇酸盐培养基 真菌培养基 选择性培养基 阴性对照及阳性对照 阴性对照 阳性对照 抑菌试验 无菌检查法 无菌检验结果判断 阴性对照应不长细菌，说明培养基本身是无菌可靠的；阳性对照试验必须长菌，说明应用的细菌是可以在该试验条件下正常生长的。 需氧菌阳性对照菌：金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003或藤黄八叠球菌CMCC(B)28001 厌氧菌阳性对照菌：生孢梭状芽胞杆菌CMCC(B)64941 真菌阳性对照菌：白色念珠菌CMCC(F)98001或曲霉菌ATCC16404