几种食用真菌超氧化物岐化酶的提取及活性测定生物毕业论文.doc

理工学院 毕业设计(论文)开题报告 题 目：几种食用真菌超氧化物岐化酶的提取及活性测定 学生姓名： 董建峰 学 号： 08L0304102 专 业： 生物科学 指导教师： 李 敏 2012 年 3月 15 日 1．结合毕业设计（论文）课题情况，根据所查阅的文献资料，每人撰写2000字左右的文献综述： 超氧化物歧化酶及应用 1　超氧化物岐化酶的发现和分类地位 超氧物歧化酶(Superoxide Dismutase简称SOD，ECl.15.1.1)是一种新型酶制剂。1938 年Mann 和KeilinJ［1］首次从牛红细胞中分离出一种蓝色的含铜蛋白质(Hemocupreid),1969年，Mccord和Fridobvich ［2］发现其能催化超氧阴离子（O2—）的歧化反应而将其命名为超氧化物歧化酶（SOD），并阐明了超氧阴离子自由基的生物学意义，该酶是体内一种重要的氧自由基清除剂，能够平衡机体的氧自由基，从而避免当体内超氧阴离子自由基浓度过高时引起的不良反应，同时SOD是一种很有用途的药用酶。有关SOD的研究受到国内外学者的广泛关注，涉及到化学、生物、医药、日用化工、食品诸领域，是一个热门研究课题。通过多年努力，在SOD的基础研究方面取得了巨大成果。在SOD的制备、结构功能研究及抗衰老、抗辐射、抗炎和抗癌及其作用机理、吸收机理研究方面已取得很大进展。 CuZnSOD是真核生物酶，主要存在于真核细胞的细胞质和叶绿体的基质中，动物血肝、奶、植物叶、果等均含CuZnSOD。CuZnSOD中一个酶分子的亚基含一分子Cu和一分子Zn,Cu位于酶的活性中心,酶的形状呈一椭圆形狭长的口袋,Cu位于“口袋”的底部,与一分子水和4个组氨酸(His)残基形成配位键,Zn则通过咪唑基与其中之一的His残基相连。[3] SOD类型： 超氧化物歧化酶按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。 2　SOD的生产方式 ??? 目前国内已开发的SOD产品绝大分都是Cu/Zn-SOD，它们最早是从动物的血、肝中分离提取的，动物SOD的分离提取技术也较为成熟。人们相继从牛、猪、羊、马等动物红细胞、肌肉、肝脏组织中分离和纯化出SOD。SOD常用的纯化制备方法有离子交换法、疏水色谱、凝胶过滤法和金属螯和亲和层析法等。提取方法主要有以下几个步骤：溶血液制备、选择性热变性、超滤浓缩、丙酮沉淀、柱层析、冷冻干燥［4］。 但是，由于这种方法不可避免地发生一些交叉感染，过敏性反应等现象，开发研究从植物中提取SOD就显得尤为重要。我国近年来在植物SOD的研究领域有大量相关报道。许平［5］、袁艺6］、赵文芝［7］、余旭亚［8］等分别从大蒜、桑叶、沙棘、仙人掌中提取SOD并进行了相关研究，其提取方法主要有分步盐析法、有机溶剂沉淀法、层析柱法等。除了从动植物中提取SOD外，选育SOD高产菌株进行发酵生产也是比较有价值的一种方法［9，10］。 由于天然SOD来源有限，且具有异体蛋白免疫原性，外源SOD不易被人体接受等缺陷，使之在应用方面受到很大限制。SOD基因工程是广开酶源，降低成本和获得无抗原性的人源SOD的有效途径。与天然SOD相比，SOD的模拟物有着更显著的优点：首先是获取和制备比天然SOD要简单得多，其次，天然SOD作为一种生物大分子，在进入体内时存在着进入细胞能力弱、细胞渗透性差、在血中半衰期短、不能口服、价格昂贵等缺点［11］，所以，目前，生物无机化学家们合成和表征了一系列含铜、锰、铁等金属离子的小分子配合物来模拟SOD，期待将来能用小分子模拟化合物代替SOD应用于临床。其中研究最多的含铜络合物是3，5-二异丙基水杨酸铜［Cu(3，5-DIPS)］［12］，这是一种低分子量的亲脂性络合物，具有天然Cu/Zn-SOD样活性，可以起到抗炎及减轻由链脲菌素诱导产生的糖尿病。刘京萍等［13］合成的铁(Ⅱ)-酪氨酸模拟SOD金属酶，分子量比天然酶小得多，与天然SOD活性差距较小，且毒性小，从而大大推进了人工合成具有分子质量较小、稳定性高、毒性较底、活性较高等优点的SOD模拟物的研究工作。 由于SOD催化的反应的特异性，科学家们一直努力寻找适合其特性的简便、精确的测活方法，多年来相继建立的多种活性测定方法，一般分为两大类：直接法和间接法。而直接法往往