慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及机制.pdfVIP

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2018-02-04 发布于湖北
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慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及机制.pdf

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2017 年9月第 29 卷第5 期论著 Effect and mechanism of 慢病毒介导的 lentivirus-mediated silencing TPX2基因沉默 of TPX2 gene expression on 对人宫颈癌HeLa proliferation, migration and 细胞系增殖、迁移 cell cycle of HeLa cells 和细胞周期的影响及机制 SONG Shufang，CHANG Haiping*，YANG Cairong， * 宋淑芳，常海平，杨彩容， ZHAO Rongwei，ZHANG Long，REN Jie，ZHENG Jian 赵荣伟，张 ●龙，任 ●杰，郑●健 (Department of O bstetrics and Gynecology, （内蒙古医科大学附属医院妇产科， Aff iliated Hosp ital of I nner Mongolia Medical ● ● 内蒙古呼和浩特 010050） College, Hohhot 010050, Mongolia, China) 研究慢病毒介导的基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、周期的影响及其机制。方法：构建种【摘要】目的： TPX2 迁移和细胞 4 靶向TPX2基因的慢病毒表达载体(LV-TPX2-shRNA- 1/2/3/4)，同时构建阴性对照质粒，将5种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒。慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞后，实时荧光定量PCR和Western blot分别检测TPX2mRNA和蛋白的沉默效果。选择沉默效果最佳的重组慢病毒进行后续功能实验。分别采用CCK-8法、Transwell迁移实验及流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移及细胞周期分布情况。Westernblot检测TPX2-shRNA转染前后Ki-67、cyclin B2 、Aurora-A及P53的表达。结果：与对照组比较，构建的靶向 TPX2基因的RNA干扰慢病毒载体均可持续稳定的抑制HeLa细胞TPX2基因的表达，尤其以LV-TPX2-shRNA-1最为明显(P0.01)，故选择LV-TPX2-shRNA-1进行后续实验。与对照组比较，沉默TPX2基因的表达能降低HeLa细胞增殖及迁移能力(P0.05)，使 G2及S期细胞比例明显增加(P0.05)，且上调P53蛋白的表达水平，下调Ki-67、cyclin