泽蛙性腺分化及温度对性别决定影响.ppt

泽蛙的性腺分化及温度对性别决定的影响 动物学报 Acta Zoologica Sinica 主讲人： 主要内容 1 材料与方法 2 结 果与分析 动物的性别决定和性分化一直是生物学领域颇受关注的课题之一。目前已经知道,脊椎动物的性别决定机制主要有遗传性决定(Genetic sex determination, GSD)和环境性决定(Environmental sex determination,ESD)两大类。 有关温度对两栖类性腺分化影响的研究,早在20世纪初就有过报道。 用高温32℃±2℃培育美洲林蛙(Rana sylvatica)的蝌蚪,发现有雄性化的趋势。以后在北非肋突螈(Pleurodeles poireti)、冠欧螈和滞育小鲵(Hynobius retardatus)等一些(Triturus cristatus)两栖类,都有相类似的报道。 在我国,有关两栖类的性腺分化以及温度对性腺分化影响的研究极少,仅中国林蛙(Rana temporariachensinensis)有这方面的报道(李新红等, 2001)。 泽蛙(Rana limnocharis)体型小、分布广,是我国南方常见的种类。其生殖期较长,每年的4 -9月都可以从野外获得性腺发育成熟的雌、雄蛙进行人工催产,获得受精卵,因此是进行发育生物学实验的好材料。本文采用不同温度培育泽蛙的性别尚未分化的蝌蚪,观察在不同温度条件下,蝌蚪的发育状况、性分化规律以及雌、雄性比变化,探讨温度对泽蛙性腺分化的影响。 1 材料与方法 1.1 实验材料的获得 泽蛙捕获自福州市郊城门镇农田。2006 -2007两年在泽蛙的繁殖季节(4 -9月),挑选性腺发育成熟的雌蛙共150只,每批次人工催产雌蛙20 -30只,获产率90.5%。 1.2 不同水温的培育方法 将同一批次刚孵出蝌蚪(Gosner 25期)随机分成5组,每组150尾,其中4组为实验组,分别设定为18℃±1℃、30℃±1℃±、32℃± 1 ℃±、34 ℃± 1℃温度处理组;在自然水温23 ℃-25℃中发育的则为对照组。 1.3 取材及组织学制片 按上述方法另外培育一批每批次的蝌蚪,用以定期取样,制作组织学切片,观察原始生殖细胞的迁移、生殖嵴的形成以及性腺分化。采用Bouin液固定组织,常规梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋;制作连续横切片,切片厚7um, HE染色。切片标本置显微镜(配冷光源数码相机)下观察、拍照。对完成变态的幼蛙,进行解剖区分精巢或卵巢结构。 1.4 数据分析 对于测量数据以平均值±标准差(Mean ± SD)表示。以Spss 13.0统计学软件对实验数据进行V2测验(V2-Test),主要比较各实验组幼蛙的成活率和雄性率与对照组的差异显著性(P0.05为差异显著)。 2 结 果与分析 2.1 性腺发生及分化 泽蛙的性腺分化以对照组23℃±25 ℃的为准。从孵化期蝌蚪开始至完成变态的幼蛙为止,体内原生殖细胞(Primordial germ cells, PGCs)的迁移、生殖嵴和原始性腺形成,以及性腺分化过程如下述 2.1.1 原生殖细胞的迁移和原始性腺的形成 刚孵出的蝌蚪, 观察蝌蚪躯干部过前肾和消化道的连续横切片,背大动脉之下腹膜上皮与消化道之间的背肠系膜上,可发现PGCs单个分布(图I: 1),数量很少。PGCs呈圆形或椭圆形,胞体明显较其周围的体细胞大,胞径均值(长径x短径,下同)为10.8umx8.8um,核径均值为6.8umx5.2um。核大,着色浅,核膜清晰可见,核仁1 -2个。 孵化后1 d蝌蚪,全长6.5 mm±0.3 mm。切片观察, PGCs已迁移到背肠系膜两侧的腹膜上皮上,仍旧单个分布,胞径均值为11.4umx8.2um,核径均值5.9umx4.6um 。 4d蝌蚪,全长7.7mm±0.6mm。在中肾管下方,靠近背大动脉的腹膜上皮上,左右两侧各向腹腔突出形成1对纵行隆起,此为生殖嵴(Germinal ridge)。刚出现的生殖嵴很小,由体细胞和PGCs构成。在生殖嵴中可以观察到1 -2个PGCs (图I: 5)。PGCs的胞径均值16.1umx12.2um,核径均值13.5umx10.5um。 6 d蝌蚪,全长912 mm±0.5mm。生殖嵴体积略有增大,生殖嵴中的PGCs的数量增加,在一个切面上最多可见到5个PGCs (图I: 6)。PGCs体积有所变小,胞径均值为14.6umx11.0um,核径均值10.6umx6.4um。从6 d蝌蚪至12 d蝌蚪,生殖嵴变化不大