hplc使用常识.pdf

凯莱德色谱专卖 色谱配件、配套仪器、消耗品系列之 凯莱德色谱专卖 色谱配件、配套仪器、消耗品系列之 色谱应用常识 色谱应用常识 咨询电话：022 色谱应用常识 色谱应用常识 24hr.热线： 色谱填料 色谱填料 现代高效液相色谱分析中，分离效果好坏的一个重要前提是色谱填料的选择。 一.硅胶基质填料 1．正相色谱 正相色谱使用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺集团，如(NH,APS)和氰集 2 团(CN,CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其它极性集团极性较强，因此，分离的 次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组分最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流 动相极性相对固定想为低，如正己烷(Hexane)、氯仿(Chloroform)、二氯甲烷(Methylene Chloride) 等。 2．反相色谱 反相色谱用的填料通常是以归教委机制，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反相色谱所使 用的流动相极性较强， 通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品刘出色谱柱的顺序是极 性较强的组分最先被冲出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有： C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、CH(Phenyl) 6 5 等。 二.聚合物填料 聚合物调料多位聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其主要优点是在pH之为 1~14均可使 用。 相对于硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分 离非常有效。相对于硅胶基质填料，聚合物填料的色谱柱柱效较低。 三.其它无机填料 其它无机填料的色谱柱目前也已经走向商品化。由于这类填料的特殊性质，一般多用于特殊用途。 例如：石墨化碳作为反相色谱填料，不需表面改性，保留能力强，可用于分离某些几何异构体，并 可在任何温度和pH值下使用。氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的柱床，可再pH=12的流动相中使 用。新型氧化锆基质色谱填料，应用范围pH 1-14，温度可达100℃，目前仍在研究之中。 四.粒度选择 目前市场上出售的色谱填料粒度一般在1um-30um，而分析分离用填料粒度集中在3-5um。填料粒度 主要影响色谱柱的两个参数：柱效和背压。粒度越小，比表面积越大，注销相对越高，而柱压越大。 这就是3um 以下填料使用受到限制的缘故。相同条件下，3um 填料色谱柱的背压是5um 的两倍。柱效 提高的益处在于可以选择更短的色谱柱，缩短分析时间。同时，可以采用低黏度 （如乙腈代替甲醇） 的溶剂作流动相并增加色谱柱的使用温度 （使用柱温箱），以降低色谱柱的压力。 天津市凯莱德仪器设备科技有限公司 电话：02227305248 传真：022 E-mail:hplc@ 热线：1303229501624.hr 凯莱德色谱专卖 色谱配件、配套仪器、消耗品系列之 凯莱德色谱专卖 色谱配件、配套仪器、消耗品系列之 色谱应用常识