绿藻栅藻培养.docVIP

绿藻栅藻培养 藻类，特别是单细胞藻类的营养丰富，含有动物和人生长发育所必需的营养物质。自上世纪四十年代以来,各国学者都试图用藻类这一资源解决人类食物和动物饵料的缺乏问题。另一方面，藻类可直接或间接的作为鱼类及其他水生动物的饵料。 1 藻类的培养方式 藻类的培养方式，以藻类培养的目的要求而各种各样。但可分为密闭式培养和开放式培养两大类。 1.1密闭式培养 密闭式培养的目的是不使外界杂藻、菌类及其他有机体混入培养物中。将培养液密封在与外界完全隔离的透明容器中，由此通气，搅拌，输送培养液及调节水温和取样等设备，也都要与外界隔离。培养容器多为管状，也有池状，用有 机玻璃或透明的聚乙烯所料做成水平管道，直立或斜立在地上，暴露阳光或人工光照下。这种培养方式，成本高，好控制，产量亦稳定。 1.2开放式培养 将藻类培养于敞开的容器(如水泥池、管道、木盆等)中。方法设备较简便，可进行小量或大面积的培养。该法培养物中易发生敌害生物污染，但成本低，使用较普遍，也是今后藻类培养所应采取的方式。开放式可分如下几种类型： (1) 开放循环培养：其特点式培养液借助循环水泵而不断循环流动。培养物能循环，就可省却搅拌工作。 (2) 开放非循环培养：其特点是培养液不循环流动，而定时由小管通入CO2 和空气到培养液中；同时也起搅拌作用。此法在大面积培养中使用较普遍。优点是设备简单，无需动力，水泵及大量的CO2 及通气设备。 (3) 半开放循环培养：半开放培养是指培养容器或池，槽等场所虽仍敞开，但有些部分密闭，或用塑料布覆盖。这种培养方式，利用管道，依靠动力，使培养液流动和通入含二氧化碳的空气。该方式设备复杂，但效果较好。 2 藻种的分离 为了要进行某种藻类的科学研究活大量培养，有必要把某种藻类与其他生物分离。分离培养藻种，可分为两大类，一为单种培养，即藻类虽只有一种，但还混杂细菌。另一为纯培养，即不仅藻类只有一种，亦无其它任何生物。纯培养比较困难，一般的分离培养往往只能做到单种培养。 主要根据培养的目的要求，及某一种类的生物学特征。藻类的分离主要有以下几种常用方法。 2.1 离心法 将混合液用离心机离心，水中不同藻体及细菌就以不同的速度下沉，因此得以分开。这样将不同时间下从导管底的藻体取出，经镜检选定某种藻类最多的沉积物，再加清水，继续离心，如此反复就可得到比较单纯的藻体，在接种相应培养液中培养。该法可消除细菌，并增加纯粹分离的可能性，至少可作为藻种平板培养的准备工作。另外，在水液中藻体含量较少时，可用此法集中藻体。但此法不能做到使不同藻类完全分离。 2.2 稀释法 该方法用已消毒试管5只，在第一管盛蒸馏水10mL，第2～5管都装5mL，用高压蒸汽消毒，待冷却后，第1管用滴管滴入混合藻液1～2滴，充分振荡，使均匀稀释。每次用消毒吸管，从第1管中吸取5mL滴入第二管中如前振荡，使均匀稀释。以后依次同样滴入第3～5 管，并都充分均匀稀释。然后把五个已盛又消毒的琼胶培养基培养皿，加热使之溶解，待冷却而尚未凝固时，分别滴入五个试管的藻液各一滴，用力振荡，使藻液充分混乳培养基中。待冷凝后，把五个培养皿放在受着漫射光窗口，一直到出现藻群时为止，在20℃左右时，约10天即出现藻群。用消过毒的白金丝取些藻群，进行琼胶固体培养基的不通气培养。此过程反复多次，直至得到完全分离的纯藻种群为止。此法稀释要使用较多容器分组培养，比较麻烦，但较易成功。 2.3 微吸管法 将水样在载玻片上滴成绿豆粒大小的一些水滴，这样可使每个水滴中有很少生物而便于分离；在解剖镜下用微吸管(口径小至0.008～0.16 mm，圆口，可自行拉制)。将要分离的藻体吸出，用蒸馏水或平衡矿物质溶液冲洗数次，然后主导成有培养基的小培养皿中培养，待生长旺盛后，再扩大培养。此法较适用于能运动的藻类。 2.4 趋向法 利用藻类的特殊趋向性(如向光，向地等)不同而分离藻体。此过程反复几次就可得到一定纯度的藻体。分离效果较好，只是不能应用于不运动的藻体。 2.5 平板分离法 在培养液中加入战培养液1.5%的琼胶，加溶解后，注入培养皿中，加盖后用15磅压力121℃灭菌20分钟，即制成胶质培养基(也可用硅酸胶和明胶制备)。在琼胶培养基放在40℃以下的水浴锅内，开改用吸管注入混合藻液，摇匀，使之分散在培养基平面上。之后，可放在恒温箱内，用荧光灯照射，使藻群生长。再经镜检，反复此法不断提纯，即可分离出较纯的藻种。 2.6 固氮蓝藻分离培养法 将一小片藻丝群接种到培养基上，几天后再用灭菌白金丝挑取生出的新藻丝接种到平板培养基上。这样经几次分离接种就得到较纯的藻种。 3 藻种的选择、接种和保存 3.1 藻种的选择 虽然藻类种类较多，但其中仅少数经过人工培养。应该研究在室外培养其他藻种的可能性和他们生产的潜力，所选择的生物种应具有下