第二章第五节基因操作原理.pptVIP

3）操作简便易行 PCR扩增法,只需要数小时,就可以用电泳法检出1μg基因组DNA中仅含数个拷贝的模板序列。 通常的DNA 扩增法是分子克隆法, 首先要构建含有目的的基因的载体, 然后将它导入细胞后进行扩增,还要用同位索探针进行筛选;这种方法,要经过DNA内切、连接、转化和培养等相关的过程,操作复杂,一般需要数周时间。 4 ）用途广泛 生命学科 医学工程 遗传工程 疾病诊断 法医学 考古学 二、PCR的类型 1. 反向PCR(inverse PCR) 一种简单的扩增已知序列周边序列的方法。 扩增原理： 已知序列 未知序列 未知序列 限制酶 限制酶 连接酶 步骤： 首先用已知片段内部没有的限制性内切酶切割模板 DNA ， 再将酶切后的 DNA 片段连接成环状分子， 最后根据已知片段两端的序列设计引物， PCR扩增邻近的DNA 片段。 2.利用接头的PCR 步骤： (1)基因组DNA的限制性内切酶酶切， (2)接头与限制性内切酶片段的连接， (3)已知序列侧翼未知序列的PCR扩增（利用分别根据已知序列和接头序列设计的引物）。 3.热不对称交错PCR TAIL-PCR的基本原理： 利用目标序列旁的已知序列设计3个嵌套的特异性引物（简称sp1，sp2，sp3），用它们分别和1个具有低Tm值的短的随机简并引物（arbitrary degenerate