初步筛选出含有类戴奥辛物质的样本-昆山科技大学eportfolio.pptVIP

 利用重組酵母菌報導基因試驗法檢測臺灣河川中類戴奧辛物質 廖猛崴，成功大學環境工程研究所碩士班研究生 張哲維，成功大學環境工程研究所碩士 周佩欣，成功大學環境工程研究所助理教授 計畫編號：NSC-98-2221-E-006-020-MY3 摘要 戴奧辛對生物體所產生的毒性，主要是經由芳香烴受體（Aryl hydrocarbon receptor, AhR）所誘發。類戴奧辛物質為能與AhR結合之物質，其結構可能與戴奧辛類似，並藉由與AhR結合而對人體或是其他生物產生多種毒性反應。本研究為調查台灣河川受類戴奧辛物質污染之狀況，於特定流域採樣並利用轉殖入人類AhR/Arnt基因之酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）進行類戴奧辛生物毒性試驗分析。初步篩選出含有類戴奧辛物質的樣本，並以逆相式高效率液相層析儀（Reverse phase-High performance liquid chromatography, RP-HPLC）分離之，以進一步探討不同採樣點中會結合AhR之化合物是否相同。另外亦透過液相層析串聯式質譜儀等儀器，嘗試鑑定主要會與AhR結合之污染物質。 實驗結果顯示鹽水溪流域之類戴奧辛物質當量濃度較其它各個流域要來的高。鹽水溪流域中下氲之豐化橋、太平橋、鹽水溪橋所採水樣具有較高之類戴奧辛物質當量濃度，其中又以枯水期間於豐化橋所測得的數值為最高，類戴奧辛當量濃度高達14.9 ± 2.1 nM β-NF-equivalent。此外，以類戴奧辛生物毒性試驗法分析經液相層析儀分離後之分段樣本，判定不同採樣點中並非為同樣之污染物質會與AhR結合。 關鍵字：重組酵母菌報導基因試驗法、類戴奧辛物質、芳香烴受  前言 在現今科技發達的時代，各式各樣的污染物藉由各種型式排放到環境中。新興污染物（Emerging contaminants, ECs），定義為「新認定」或「之前未確認」的污染物，包含：界面活性劑及其殘留物、個人護理用品、汽油添加劑、塑化劑及各種工業添加劑等。其中會與細胞的核內受體作用，進而干擾內分泌系統之物質稱為內分泌干擾物質（Endocrine disruptive chemicals, EDCs），此類物質會干擾生物內分泌系統的合成、分泌、傳導、結合與作用，影響生物內分泌系統與生殖系統的平衡，以及生物的發展或行為（Said Kinani et al., 2010, Mazurová et al., 2008）。常見細胞核內受體有會與類雌激素結合之雌激素受體（Estrogenreceptor, ER）及會與類雄激素結合之雄激素受體（Androgen receptor, AR）等。 戴奧辛由鹵化芳香烴碳氫化合物（Halogenated aromatic hydrocarbons, HAHs）及其它同類型的物質所組成，如多氯二聯苯戴奧辛（Polychlorinated dibenzo-p-dioxins, PCDDs）、多氯二聯苯呋喃（Polychlorinated dibenzofurans, PCDFs）、及多氯聯苯（Polychlorinated biphenyls, PCBs）（Piia Leskinena et al., 2008）。。 藉由與芳香烴受體（Aryl hydrocarbon receptor, AhR）之結合，戴奧辛可能會造成免疫系統毒性、神經毒性與致癌性，並阻礙個體發展及影響生殖能力。類戴奧辛物質之定義為其它會與AhR結合之物質，這些物質亦可能藉由AhR調節基因表現的機制誘發出毒性。環境中的類戴奧辛物質主要來自於人類活動的副產物，如工業廢水、污水處理廠放流水以及其它來源（E. Mazurová et al., 2008, C.-H. Koh et al., 2004），排入環境的主要途徑為大氣傳輸或是廢水排放（C.-H. Kohet al., 2004），一旦進入食物鏈可能會造成生物累積與生物放大等作用（Steffen Keiter et al., 2008）。 本研究之主要目的為建立一套快速、方便、成本低廉且可有效分析環境中類戴奧辛物質的生物檢測流程。所使用之生物檢測法為轉殖入人類AhR/Arnt基因與報導基因質體之重組酵母菌試驗法，利用該檢測法結合儀器分析調查台灣河川受類戴奧辛物質污染之現況，並嘗試找出主要誘導活性之類戴奧辛污染物質 材料與方法 1. 樣本取得 採樣方式以在橋上使用繩子綁水桶方式，向下撈取河川之表層水，儲存於1 L的PE廣口瓶中。記錄採樣的日期、氣溫、水溫、pH值、導電度等資訊，並以GPS之TW2座標標記採樣地點。水樣攜回實驗室後於4℃下保存，並在一天內完成水樣前處理。各個河川採樣地點參考全國環境水質監測資訊網公布之水質與採樣