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SAHA 对 TGF-β 诱导人胚肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响硕士研究生：谢莉导师：何振华教授中 文 摘 要目的探讨在转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激下，组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰 苯胺异羟肟酸（SAHA）对人胚肺成纤维细胞系 HELF 向肌成纤维细胞(MF)分化 的影响，从而为其用于治疗 IPF 提供理论依据。方法实验分为对照组，TGF-β1 组（5ng/mL）和不同浓度 SAHA 处理组（0.5，2， 5μM）。体外培养 HELF 细胞，用 5ng/mL TGF-β1 和 5μM SAHA 共同刺激 24h， 观察处理前后细胞形态学变化情况，以探讨 SAHA 对 HELF 向肌成纤维细胞（MF）转分化过程的影响； HELF 细胞先用 TGF-β1 刺激 24h，随后加入 0.5， 2，5μM SAHA 共孵育 24h，MTT 法检测细胞的增殖情况，Western blot 检测 α-SMA 表达，比色法测量羟脯氨酸的含量，天狼猩红染色分析总胶原含量，以及 RT-PCR 检测 I、III 型前胶原的 mRNA 表达水平。结果1.正常对照组的细胞呈长梭形，呈一定的弧形生长，胞核较大，成卵圆形且 多居中。经 TGF-β1 作用后，细胞密度明显增加，呈漩涡状、放射性生长。当 HELF 细胞经 5μM SAHA 共同孵育后，细胞间隔增宽，突起缩短，细胞质减少。2.HELF 细胞经 TGF-β1 作用后，其增殖活性显著增高。当给予 5μM SAHA2处理后，细胞增殖率减少了 29.5%，与 TGF-β1 组相比，差异具有统计学意义。.对照组羟脯氨酸表达极低，TGF-β1 处理后，羟脯氨酸含量显著增高。当 用 0.5，2，5μM SAHA 处理后，羟脯氨酸含量随着 SAHA 浓度的增加而减少。.对照组中几乎无 α-SMA 蛋白表达，TGF-β1 处理后 α-SMA 水平显著增高， 而 SAHA 能有效降低 α-SMA 的水平。5.TGF-β1 组（B 组）总胶原含量显著高于对照组。0.5，2，5μM SAHA 处理 后，胶原含量随剂量的增加而减少。6.SAHA 孵育 24h 后，能够明显抑制 TGF-β1 刺激后的细胞表达 I 型和 III 型 前胶原蛋白 mRNA，并且具有明显的剂量依赖性。结论SAHA 能抑制 TGF-β1 诱导 HELF 细胞向 MF 的分化和增殖，主要表现为生 长抑制、α-SMA 表达降低以及前胶原蛋白表达减少。关键词辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）；转化生长因子-β1；人胚肺成纤维细胞；α- 平滑肌肌动蛋白；胶原蛋白3The effects of SAHA on TGF-β induced transformation of human embryonic lung fibroblasts to myofibroblastsObjectiveExplore the effects of the histone deacetylase inhibitors, suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA) on the transforming growth factor-β1-induced differentiation of human embryonic lung fibroblast cell line HELF cells to myofibroblasts (MF), and thus provide a theoretical basis for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis (IPF).MethodsRats were divided into control group, TGF-β1 group (5ng/mL) and SAHA groups with different concentrations (0.5μM, 2μM and 5 μM). HELF cells were cultured with the combined stimulation of 5ng/mL TGF-β1 and 5μM SAHA for 24h. Then the morphological changes were observed before and after treatment, and explored the effects of SAHA on the differentiation of HELF to MF. HELF-I cells were stimulated with TGF-β1 for 24h, then 0.5, 2, 5 μM SAHA was added