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Wnt信号通路激活Caski细胞系Twist基因的检测与分析中文摘要目的：通过氯化锂激活宫颈癌Caski细胞Wnt信号通路后，检测Twist基因的mRNA和蛋白水平表达差异，探讨宫颈癌Caski细胞系Wnt信号通路与Twist 基因的关系，为宫颈癌的发病机制提供实验依据。方法：体外培养宫颈癌Caski 细胞，不同浓度的氯化锂激活Wnt信号通路后，MTT筛选出适宜的激活剂浓度，实验分为7 组：对照组（未加氯化锂的Caski 细胞）及氯化锂浓度分别为0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025mol/L，分别培养12h、24h，MTT检测各组细胞在不同浓度和时间点细胞生长抑制率，筛选出氯化锂的最低抑制浓度和第二低抑制浓度；Western blot 检测Wnt 信号通路活化的标志蛋白β-catenin 的表达水平。RT-PCR和Western blot检测Caski 细胞系在Wnt 信号通路激活状态Twist基因的mRNA和蛋白表达水平；实验分为5 组：（1）对照组（未加氯化锂的Caski细胞）；（2）氯化锂最低抑制浓度处理12h；（3）氯化锂最低抑制浓度处理24h；（4）氯化锂第二低抑制浓度处理12h；（5）氯化锂第二低抑制浓度处理24h。RT-PCR和Western-blot 检测五组细胞中Twist 基因的表达情况，分析Wnt信号通路激活状态下Twist基因的mRNA和蛋白的表达水平。结果：1.不同浓度氯化锂处理Caski细胞，在培养12h和24h后，计算得出氯化锂最低抑制浓度和第二低抑制浓度分别为0.05 mol/L、0.1 mol/L，两组浓度在12h、24h 相对应的细胞抑制率为6.600±0.027，4.200±0.063 和21.800±0.021，46.200±0.073。2.氯化锂激活Wnt 信号通路后，β-catenin 的表达水平增高（P0.01）。3.氯化锂0.05 mol/L、0.1mol/L分别处理12h组，氯化锂0.05 mol/L、0.1mol/L分别处理24h组中Twist基因的mRNA和蛋白表达水平较对照组均显著升高(P0.05)，表明Caski细胞系中Wnt信号通路激活后，可以导致Twist基因的表达增高。结论：1.氯化锂作用于Caski 细胞后，β-catenin 的表达水平增高，说明Wnt信号通1路激活。2.在Caski 细胞中，氯化锂通过激活Wnt 信号通路而促进Twist 基因的表达上调。关键词：Caski细胞；Twist基因；Wnt 信号通路；宫颈癌2DetectionandanalysisoftheTwistgenewhichwasactivatedbyWntsignalpathwayinCaskicelllinesABSTRACTObjectiveWntsignalpathwayincervicalcancercaskicelllinewasactivatedbylithium chloride,thendetectedthedifferentexpressionofTwistgeneinmRNAandprotein level.ToinvestigatetherelationshipbetweenWntsignalpathwayandTwistgenein cervicalcancercaskicellline,providedtheexperimentalbasisofthepathogenesis forcervical cancer.MethodsAftercultivatedcervicalcancercaskicellline,theWntsignalpathwaywas activatedbydifferentconcentrationoflithiumchloride,thenselectedthesuitable activator concentration byMTT.This experiment was divided into seven groups:control group (without lithium chloride)and 0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025mol/Lsixconcentrationoflithiumchloridegroups.Afterfostered12hours、24hours,thecell growthinhibitionrateindifferentconcentrationandtimewasdetectedbyMTT,then screened out the minimum inhibition concentration and second low inhibitionc