β2sp对肝癌细胞诱导分化作用word论文.docxVIP

β2SP对肝癌细胞诱导分化作用华中科技大学同济医学院附属协和医院硕士研究生：商海涛导师：宋宇虎副教授叶进教授摘要【目的】：探讨β2SP（β2血影蛋白）对肝癌细胞Huh7和SNU398诱导分化作用【方法】：构建人的β2SP真核表达载体pcDNA3.1(-)-β2SP,酶切鉴定，测序证实。将构建成功的β2SPcDNA真核表达载体以及对照质粒pcDNA3.1(-)分别转染肝癌细胞Huh7和SUN398,48h后Real-time RT-PCR和Westernblot检测β2SP在上述肝癌细胞中的表达情况。同时分析（1）β2SP对肝癌细胞Huh7和SNU398肿瘤生物学特性的影响：CCK8法检测细胞增殖；Western blot检测细胞周期蛋白（CyclinA2、B1、D1、E1、CDK4）、凋亡相关蛋白C-caspase3以及p53、pRb；流式细胞仪分析细胞周期。（2）β2SP对肝癌细胞Huh7和SNU398诱导分化作用：Real-time RT-PCR分析肝脏功能蛋白（ALB、HNF1、HNF4、G6PC、OAT、ADH1、CRP、CYP7A1）和肝癌特异性肿瘤标志物AFP的表达；Real-time RT-PCR分析肝癌干细胞表面标记物表达（CD133、CD90、EPCAM、CK19）。【结果】：（1）经过鉴定证实成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-β2SP。（2）Real-timeRT-PCR和Westernblot结果显示，β2SPcDNA真核表达载体转染肝癌细胞Huh7和SNU398后，β2SP的表达明显上调。（3）β2SPcDNA真核表达载体转染肝癌细胞Huh7和SNU398后，肝癌细胞增殖力明显下降；肝癌细胞显著发生G0-G1阻滞；细胞周期蛋白表达明显下调。（4）β2SPcDNA真核表达载体转染肝癌细胞Huh7和SNU398后，肝脏功能蛋白表达明显上调，肝癌干细胞表面标记物表达明显下调。1【结论】：β2SP可以抑制肝癌细胞增殖，诱导凋亡，促进细胞周期阻滞；β2SP对肝癌细胞具有诱导分化作用。【关键词】：β2SP，肝癌，诱导分化2Effectofβ2SPonthedifferentiationofhepatocellularcarcinomacellsDepartmentof gastroenterology, Union HospitalofTongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityof Science andTechnology Postgraduate：HaitaoShangSupervisor：Associate Prof.Yuhu SongProf.JinYeABSTRACTObjective:Toinvestigatetheeffectofβ2Spectrinonthedifferentiationoflivercancer Huh7 and SUN398 cells.Methods:Toconstructthehumanβ2Spectringeneeukaryoticexpressionvector pcDNA3.1(-)-β2SP.Therecombinedplasmidwasidentifiedbyenzymedigestionand confirmedby sequencing,thentherecombinedplasmidofpcDNA3.1(-)-β2SPandthe controlplasmidofpcDNA3.1(-)wasrespectivelytransfectedintoHuh7andSUN398cells. Twodayslater,theexpressionofβ2SPwasdetectedbyReal-timeRT-PCRandWestern blotting.First,weanalyzedtheeffectofβ2Spectrinontumorbiologicalcharacteristicsof Huh7 and SUN398 cells. The proliferation was evaluated by Cell Counting Kit, cellcycle-related proteins(CyclinA2、B1、D1、E1、CDK4) and p53、pRb weredetermined byWestern blot, the cellcycle wasanalyzed byFlowcytometry.Second,we analyzed theeffect ofβ2SpectrinonthedifferentiationofHuh7andSUN398cells.Thelevelofliverfunctionprot