过度运动可引起大鼠冈上肌腱损伤和腱细胞凋亡word论文.docxVIP

过度运动可引起大鼠冈上肌腱损伤和腱细胞凋亡word论文.docx

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过度运动可引起大鼠冈上肌腱损伤和腱细胞凋亡word论文

论文独创性说明本人申明所呈交的学位论文是在我个人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名:签字日期:导师签名:签字日期:关于论文使用授权的说明本人完全了解学校关于保留、使用学位论文的各项规定,(选择“同意/不同意”)以下事项:1.学校有权保留本论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文;2.学校有权将本人的学位论文提交至清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》或其他同类数据库,传播本学位论文的全部或部分内容。学位论文作者签名:签字日期:导师签名:签字日期:前言肩袖损伤(rotatorcuffinjury)多见于常有过肩活动和50岁以上的人群[1],是造成肩部疼痛、肌无力和肩关节的活动能力丧失的主要原因。肩袖是由冈上肌、冈下肌、小圆肌、肩胛下肌的肌腱在肱骨头前、上、后方形成的袖套样肌样结构。Tempelhof S等研究发现肩袖损伤的总体发病率为23%,其中50 至59 岁发病率为13%,60 至69 岁为20%,70 至79 岁为31%,80 岁以上为51%。很多流行病调查和临床资料均显示了肩袖损伤的发病率较高,并以冈上肌腱损伤最为多见[1,2,3,4]。肩袖损伤病因非常复杂,包括年龄,退变,危险区(criticalzone)血管减少,肩峰下撞击征,肱骨大结节骨折及肩关节脱位等创伤和反复的过度运动(overuse)。Codaman描述了冈山肌腱近止点处的危险区(critical zone)是肩袖撕裂的最常发生部位,组织学检查也证实了损伤部位有血管减少和胶原纤维断裂的现象[5]。Macnab等应用现代显微注射技术和激光流量测定技术显示该区域有充足的血供,为非单一解剖因素造成肩袖损伤的观点提供了支持[6]。Neer 提出肩峰撞击学说,认为肩峰形态与肩关节撞击征密切相关,且肩峰下滑囊炎可能是肩袖损伤的又一因素,可以发生在撞击征后[7]。Neer 等将肩袖损伤的病理过程分为三个阶段:(1)肌腱水肿和出血;(2)肌腱纤维化和肌腱炎(3)骨刺形成和肌腱断裂。过度运动被认为是造成早期肩袖损伤的重要原因[8]。有关过度运动导致的肩袖损伤发病率的报道,特别是在青少年体育爱好者及运动员中,有逐年增加的趋势[9]。到目前为止,过度运动如何引起早期的肌腱劳损的机制尚未明确,其原因是在临床中所遇到的肩袖损伤病例以及获取的肌腱劳损标本均处于中晚期,早期病理资料较不容易获得。YuanJ在断裂的Ⅲ期冈上肌腱中发现了大量的发生凋亡的腱细胞,凋亡率约34%[10]。而Tuoheti Y也有同样的研究发现,肩袖损伤Ⅱ期的患者均可检出大量凋亡的冈上肌腱腱细胞24.92%[11]。因此腱细胞的病理性凋亡可能发生在肌腱病变的更早期,在肌腱的退变中起重要作用。Soslowsky[12,13]等通过使用跑台建立了冈上肌腱过度运动的动物模型,并制定了S-D大鼠适度的运动量,从组织学和生物力学角度来研究冈上肌腱的损伤过程。他们发现冈上肌腱有退行性病理改变,而非炎症反应,但未做细胞凋亡的相关研究。TUNEL法是目前检测细胞凋亡的常用方法,具有较好的敏感性和特异性。近年来,对于Caspase家族在凋亡的调控机制和致病机制方面的研究也取得很大进展。为我们选取参考指标提供参考。肩袖患者病程往往较长,经济负担重。肩袖损伤晚期很难自愈,大部分患者需行手术治疗[14]。因此,能在肌腱损伤早期针对发病原因进行有效的干预治疗意义重大。我们根据Soslowsky的动物模型使用小动物跑台建立Sprague-Dawley大鼠冈上肌腱过度运动损伤模型,观察分析早期组织病理改变和细胞凋亡变化,为探讨早期阶段的发病机理提供参考。资料与方法1 试剂与仪器1.1 主要试剂二甲苯,梯度乙醇(浓度75%,80%,95%,100%),1%盐酸乙醇,甲醇,苏木素,伊红,中性树胶,4%多聚甲醛(博士德,武汉),阿托品,氯胺酮,地西泮,0.9%氯化钠,4%多聚甲醛溶液,10%乙二胺四乙酸二钠(EDTA)脱钙剂,TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术)试剂盒(KGA7042,凯基生物,南京),Caspase3抗体(BA2142,博士德,武汉),脱氧核糖核酸酶I(MM0201,华美,洛阳),脱氧核糖核酸酶 I(DNaseI)反应缓冲液,胰蛋白酶(ZLI-910 博士德,武汉),辣根过氧化酶(Streptavidin-HRP;PV6001,中杉金桥,北京),即用浓缩型DAB显色液(ZLI9017中杉金桥,北京),DAB底

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