两种不同AFP启动子控制下表达HIV vpr基因的重组非复制型腺病毒获得及鉴定.pdfVIP

堂』地9衄：蛔!：型：型逃：2 文章编号：1007—4287(2004)02一0132一03 两种不同AFP启动子控制下表达HIV vpr基因的 重组非复制型腺病毒获得及鉴定 魏强1，李凡1，王健伟”，郭丽2，洪涛2 (1．吉林大学基础医学院，吉林长春130。2：；2．中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，北京100052) 03kbAFP启动子控制下表达}ⅡV vpr基因的两种重组非复制型腺病毒。方法采用细菌内同源重组腺病毒载体制各 方法和‰I酶切、PcR、铀lr出lerIl Blot鉴定方法。结果构建．及包装出由这两种册启动子控制下表达JⅡvv甜基因的 重组非复制型腺病毒，经M酶切、PcR和＆md，ern Bbt基因整合分析证明构建成功。结论我们成功构建了的全长 5．1kbAFP启动子和HRE与0．3kbAFP启动子两者组合的杂台o．3㈣启动子控制下表达mvvpr基因的重组非复制 型腺病毒，为使mV vpr基因更好的用于肝癌特异性基因治疗提供了可能和基础。 关键词：AFP启动子；mvvpr；重组；腺病毒 中围分类号：R373 文献标识码：A metw0 册p埘∞ter聊口咖，廿向，职眦胁州，dd．(麒硪甜犯酬矿胁％呻，嘶础m130口21，a洫) T000删tIleI佻洲nmn Al斌ract：0bjec帆 gB帖dIivedby rq矗i衄d忡i肿DⅡlpel枷日d衄州瑚琏0f旺呷商喈HⅣ’pr tIIe5．1kbAFP aden0． pr唧岫蚰dtIle0．3址胛弘州吣捌证tllⅢIE，M酬-D凼1hm嘣曲i越呲州i明¨；ncol帅dI衄t vir。11s眦ide蚵ied s0“knBh蛐d by岫P(趣and ade． ap唧ed妇d8虹．R答曲b1‰坤鲫mi岫m碑pIic蚵∞．inc∞Tp时哪t t衄ta(1el柚“娜forⅡ七8p晒山籼曲口啊0f虹k掣l量0eeIlllk瑚rci瑚懈． 酗words：册愀；哪vpr；Ⅲ蛐；妇Ⅲ如 ((赫I J￡小脚，2004，8：132) HⅣvpr为HⅣ一非结构性蛋白，分子量大约控元件中一O．4，一3．7之间o．3妯部分组合的杂舍 为14kD8。我们的前期工作表明HⅣⅥ可作为一0．3蝴启动子控制下表达HⅣvpr基因的非复制 种有效的多功能因子用于肿瘤的治疗…。组织特异 型腺病毒两种重组腺病毒。 性启动子特异性启动治疗基因在相应组织中的表达 l材料和方法 是肿瘤靶向性基因治疗研究中很重要的一个方面。 1．1细胞、质粒和菌株 甲胎蛋白在多数原发性肝细胞癌(Hcc)患者血清中 包装细胞系腺病毒E1区转化的人胚肾293细 明显升高，使甲胎蛋白启动子现以广泛应用于肝癌 胞为本室保存。腺病毒骨架质粒载体们dEasy一1，穿 的靶向性基因治疗中”1。人甲胎蛋白(AFP)基因上 游调控部分为5．1l