乙肝病毒前S1抗原和e抗原联合检测同HBV复制关系的探讨.pdfVIP

·--——1308·--—— 文章编号：1007—4287(2008)10—1308—02 乙肝病毒前S1抗原和e抗原联合检测 同HBV复制关系的探讨 赵娟1，谭延国2 (1．首都医科大学附属北京妇产医院检验科，北京100026；2．首都医科大学附属北京复兴医院检验科) 乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白(PreSl)由S基 拷贝数定量结果。其它血清标志物测定严格按说明 因的前Sl区编码，PreSl含有数个能影响I-nSsAg分书进行操作。 泌的调节序列，其特定氨基酸序列可参与HBV感染 1．5统计学处理采用SPSS8．O统计软件，计数资 靶细胞的过程…。而机体对IreSl免疫应答可为清料采用卡方检验，计量资料采用方差分析处理。显 除肝细胞内HBV及阻止病毒侵入肝细胞提供重要 著性检验水准为口≤O．05。 的防御作用。本文以近年来发展起来的荧光定量 2结果 PCR法(FQ。PCR)定量测定HBVDNA，以此作为病毒 2．1 复制和传染的直接依据，来探讨HBV感染者PreSlPreSl及HBeAg在HBVDNA及HBsAg同时阳 作为病毒复制标志物的意义。 性标本中，阳性率分别显著(均为P0．0001)高于 1材料与方法 HBV 1．1标本来源血清标本取自北京朝阳医院门诊 22．73％，66．85％对6．06％)，显示二者同HBVDNA 怀疑为乙肝者、住院乙型肝炎患者以及HBV携带 复制关系密切，可作为HBV复制的指标。 者。HBV DNA及HBsAg同时阳性者184例。HBV如表l所示，184例HBV DNA及HBsAg同时阳 DNA阴性，HBsAg阳性标本132例。 1．2 主要仪器及试剂PE5700型荧光定量PCR 仪，包括一台9600型热循环仪，荧光光源，检测系统 MK 及电脑、应用软件。Wellscan3酶标仪。PreSl抗 抗原阳性、单独rmeag阳性同二者同时阳性标本之 原酶免检测试剂盒购自上海阿尔法生物技术有限公 司；乙肝两对半酶免疫试剂盒购自北京科卫临床诊 显示，此类标本PreSl和tnkAg阳性率无统计学差 断试剂厂。 异(P0．05)，即二者在评判HBV携带者病毒复制 CICCIA 1．3引物和探针引物为：P1：5’』眦C】[c 及传染性方面灵敏度相当。 TGCCTCATCTr GTGGGGGAAAGC 3’；P2：5’ACA 如表2所示，HBVDNA阴性但HBsAg阳性标本 CCT ACG从3’。探针：荧光标记的探针(F．Probe)序 CTAGTrTACAGTGCC√钔II 3 列为5’R．TGG 7， TG-Q R代表报告荧光基团，Q代表淬灭荧光基团。上述 此类标本IreSl和HBeAg阳性率差别意义非常显著 引物和荧光探针由广州中山医科大学达安基因诊断 中心合成。 及传染性方面以HBeAg特异性较高。 1．4实验操作FQ．PCR反应步骤如下：采用常规 碱裂解法从血清中提取HBVDNA，0．2ml薄壁反应 复制程度上的比较 如表3所示，HBV 管中50一反应液含1．0tanol／L引物、0．1tanol／L的 DNA及l-／／3sAg同时阳性标本 F-Probe、200 DNA聚合酶及l中，PreSl抗原单独阳性者HBVDNA拷贝数的对数 gmol／L的dNTP、3UTaq