乙型肝炎病毒感染性复制子构建及其意义.pdfVIP

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2018-04-07 发布于北京
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中国公共卫生2008年6月第24卷第6期ChinJPublicHealthYun2008V01．24No．6 ’ 中图分类号：R512．6+2文献标志码：A 【论著】文章编号：1001．0580(2008}06．0687．03 乙型肝炎病毒感染性复制子构建及其意义* 卢银平1，董继华1，刘朝1，陆蒙吉2，杨东亮3 摘要：目的构建乙型肝炎病毒(HBV)感染性复制子表达载体，建立HBV体外复制细胞模型。分析其复制特表达。SouthernBlot和NorthemBlot分析HBV复制中间体、转录物。并利用该细胞模型进行阿德福韦抗病毒研究。结果成-功构建了HBV感染性复制子表达质粒。该质粒上HBV基因能在Huh7细胞中进行有效复制、转录和表达，并能在体外短期传代12d。阿德福韦能体外抑制该HBV复制子的复制，抑制程度依赖于药物浓度。结论新构建的， HBV感染性复制子表达载体可介导高水平病毒复制，可用于HBV复制机制和抗病毒等方面的研究。关键词：乙型肝炎病毒(mV)；复制子；复制；表达 ConstructionHBV its of infectious and Ji—hua，LfU replicon significanceL【，M竹一∥疗g，DoNG Zhao，eta1．Department Medical and ofVirology，UnionHospitalofTongifCollege，HuazhongUniversity 430022， ofScienceTechnology(Wuhan China) Toconstruct vectorofHBVinfectiousandestablish B Abstract：0bjective hepatitisvirus(SBV) expression replicon modelinvitro．andobservethe ofviral andits tOanfivirM replication dynamicchanges replicationsensitivity durg．Methods 1．3fold twoheadtOtail 0fHBV clonedinto overlengthgenomeof髓V，frompHBV—dimercarting copies genome，was combinedPCRandrestriction recombinant 1．3 ofHBV pCR2．1by enzymedigestion．The plasmidscontainingcopies genome weretranslatedintoHuh7cellline．Thelevelsof and in ofHuh7cellsweremeasured HBsAgHBeAgsupernatant byELISA， intraceUular髓Vintermediatesandintracel