乙型肝炎病毒转基因小鼠外源基因的复制和传代稳定性观察.pdfVIP

第18卷第1期 实验动物科学与管理 V01．18No．1 2001年3月 I．ABORATORYANIMAI．SCIENCEANDADMINSTRATl0N Mar．200l 妒驴驴驴驴移唧 §研究·观察§ 妨、：2争、泸、：盔争、：舀≯、。舻、$ 乙型肝炎病毒转基因小鼠外源基因的复制和传代稳定性观察 刘光泽，贾彦征，王洪敏，熊一力 (广州空军医院全军传染病中心转基因工程室，广州 510602) 子杂交等检测方法，对48”、87。、90。三个系列中各15只整合阳性小鼠定期进行血清中HBVDNA存在情况以及对 各系列繁育F．一R代小鼠外源基因整合传代进行检测。结果：各系列转基因鼠血清都有HBVDNA存在，并以1月 龄时血清中HBVDNA阳性率最高，但随月龄改变，其DNA阳性率也变化，并存在系列、个体及月龄上的差异。结 论：HBV基因可在转基因小鼠体内复制、传代，且目前已稳定传至第五代(R)。 关键词：HBV转基因鼠；复制；传代；稳定性 中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：1006—6179(2001)01—0001—03 乙型病毒性肝炎是严重危害人类健康的传染性 式，保持其杂合子形式，目的避免近交繁殖带来近交 疾病，由于这一病毒具有其宿主特异性，缺乏理想动 衰退，繁殖能力下降等问题。 物模型，因而对其研究在一定程度上受到限制。近 1．3尾组织整合检测 年来，HBV转基因动物模型的建立，为研究该疾病 取待检小鼠一段尾组织，用蛋白酶K法提取尾 发病机制，致肝细胞癌变及抗药筛选研究提供了新 的途径和模型。我们通过显微注射成功地建立了 HBV转基因小鼠模型，并应用分子生物学、免疫组 化等方法在肝组织和血清中检测到HBsAg、HBV DNA的存在¨1。本文主要对该模型的传代以及血 (1974． 清中HBVDNA存在的稳定性进行研究。 DNA酶有外切酶活性，错误率低。取十分之一扩增 1材料和方法 检测验证，证实仍为阳性。 1．1转基因小鼠 1．4血清采集及HBVDNA的检测 HBV全基因导 从48。、87’、908三系列中整合阳性小鼠(48” 通过显微注射将adr型2．0copy 入ICR受精卵原核建立。由于显微注射导入外源基 系列选用F。代小鼠，87”、90”系列选用R代小鼠)， 因将随机整合在小鼠染色体基因组中，每一个转基 从30日龄开始采血，每月采一次，共8次，所有血清 因小鼠整合的位点是不同的，故每个首建者 PCR 一20℃保存，提取血清中HBVDNA进行nested (founder)小鼠均为一个独立的系列(1ine)或一个“系 检测，方法同1．3，设阴性、阳性对照。 祖”而进行繁殖传代。 1．2繁殖传代方式 2 结果 本文对48。、87’、90”三个系列F．一k各代均采 用阳性转基因小鼠与正常ICR小鼠交配繁殖传代方 2．1 收稿日期：2000—09—20 第一作者简介：刘光泽(1963一)，男，主管技师，目前从事转基因动物模型建立及培育、转基因鸡、核移植等研究。 2001年(第18卷)第1期 实验动物科学与管理 · 3 · 3．3小鼠HBVDNA复制的稳定性 本文通过对484、87。、90。三个系列转基因小