分子标记及遗传连锁图谱教学教材.ppt

第二章 遗传图谱第一节 遗传标记概述;遗传作图的标记;一 、遗传图谱与物理图谱;遗传图谱(genetic map); 经典遗传图谱 ; 现代遗传图谱 ;1、形态标记;2、细胞学标记;*黑麦(Secale cereale, 2n=14)染色体Giemsa C-带;*常规染色技术与显带技术的结果;荧光标记探针检测精子;3、生化标记——贮藏蛋白、同工酶和等位酶;同工酶与等位酶;材料的采集;夏腊梅;夏腊梅同工酶谱照片;4、分子标记;分子标记的特点;;三、分子标记的种类; 第二类是以聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction ,简称PCR反应）为核心的分子标记技术，包括 随机扩增多态性DNA标记（Random amplification polymorphism DNA, 简称RAPD标记）； 简单序列重复标记（Simple sequence repeat, 简称SSR标记）或简单序列长度多态性（Simple sequence length polymorphism, 简称SSLP标记）； 扩展片段长度多态性标记（Amplified fragment length polymorphism, 简称AFLP标记）； 序标位（Sequence tagged sites, 简称STS标记）； 序列特征化扩增区域（Sequence charactered amplified region, 简称SCAR标记）等。;第三类是一些新型的分子标记，如： 单核苷酸多态性（Single nuleotide polymorphism, 简称SNP标记）； 表达序列标签（Expressed sequences tags, 简称EST标记）等。; DNA分子标记的主要类型;第二节 限制性片段长度多态性标记技术;该技术由Grodzicker等于1974年创立。1980年由 Botstein再次提出。1983年Soller和Beckman最先应用于品种鉴别和品系的纯度的测定。 自从人的RFLP图谱构建后，已经分别构建了果蝇、牛、大豆、小麦、水稻等多种生物的RFLP图谱。;特定生物类型的基因组DNA经某一种限制性内切酶完全酶解后，会产生分子量不同的同源等位片段，或称限制性等位片段。 RFLP标记技术的基本原理就是通过电泳的方法分离和检测这些片段。 凡是可以引起酶解位点变异的突变，如点突变（新产生和去除酶切位点）和一段DNA的重新组织（如插入和缺失造成酶切位点间的长度发生变化）等均可导致限制性等位片段的变化，从而产生RFLP。 即：物种的基因组DNA在限制性内切酶作用下，产生相当多的大小不等的片段，用放射性同位素标记的DNA作探针，把与被标记DNA相关的片段检测出来，从而构建出多态性图谱。;EcoRⅠ酶切示意图;;RFLP的原理;二、RFLP标记技术的操作步骤;下列图谱哪个是合适的酶切结果？？;变性： 脱嘌呤：0.25 mol/L中脱嘌呤，10 min。 变性：0.5 mol/L NaOH， 1.5 mol/L NaCl，45 min。 水冼； 中和：1 mol/Ltris-HCl (pH7.5) ，1.5 mol/L NaCl，30min。 印迹：用10 ×SSC ，进行Southern 印迹 冲洗：以2×SSC 冼胶，风干;;—杂交—洗脱;—放射自显影—数据分析; RFLP探针的来源;标记物：放射性和非放射性两种 放射性： 非放射性：生物素、地高辛素、荧光素 ? 放射性同位素标记： 灵敏度高，成本低 但操作不便，标记效率不太稳定，寿命受半衰期限制 ? 非放射性标记（地高辛、生物素、荧光素等）： 安全，标记稳定，探针寿命较长 但灵敏度较低，背景较高，成本高;（1）随机引物法 （2）切口平移法 （3）末端标记法 （4）单链DNA探针标记 （5）寡核苷酸探针标记法 ; 探针标记—随机引物法; RFLP标记技术所用的仪器设备;三、RFLP标记特点;第三节 RAPD和AP-PCR标记技术;一、随机扩增多态性DNA标记(RAPD)的原理; 二、PCR技术------回顾： PCR(Polymerase Chain Reaction)技术： Three steps: denaturation, primer annealing, polymerization. Peoples Choice Reaction; The PCR cycle; PCR procedures; PCR reaction components and their