第5章 DNA的损伤、修复和基因突变PPT.ppt

化学诱变剂 生物诱变剂 DNA的修复 由于染色体DNA在生命过程中占有至高无上的地位，DNA复制的准确性以及DNA日常保养中的损伤修复就有着特别重要的意义。 5.2 DNA的修复 修复是生物细胞在长期进化中形成的一种保护功能，在遗传信息传递稳定性方面有重要作用. 修复系统主要有五种： DNA修复系统 修复功能 错配修复 恢复错配 切除修复（碱基和核苷酸） 切除突变的碱基和核苷酸 重组修复（复制后的修复） 重新启动停滞的复制叉修复 DNA的直接修复 修复嘧啶二聚体或甲基化DNA SOS系统 DNA的修复，导致变异 * 错配修复 错配修复对复制忠实性贡献很 大。该系统识别母链的依据来 自Dam甲基化酶，它能使位于 5’-GATC序列中的腺苷酸的N6 甲基化。一旦复制叉通过复制 起始点，母链就会在开始DNA 合成前的几秒钟至几分钟内被 甲基化。 * 之后，只要两条DNA链上碱基配对出现错误，错配修复系统就根据“保存母链，修正子链”的原则，找出错误碱基所在DNA链，并在对应于母链已甲基化了的腺苷酸的上游鸟苷酸的5’位置切开子链。再根据错配碱基相对于DNA切口的方位启动修复，合成新的子链DNA片段。 * 当错配碱基位于切口3‘下游端时，在MutL-MutS、解链酶Ⅱ、DNA外切酶Ⅵ或RecJ核酸酶作用下，从错配碱基3’ 端开始切除单链DNA直到原切口，并在Pol Ⅲ和SSB作用下，合成新的子链片段。若错配碱基位于切口的5‘上游端，则在DNA外切酶Ⅰ或X作用下，从错配碱基5’上游端开始切除单链DNA直到原切口，再合成新的子链片段。 碱基错配修复过程 示意图 * 例：E.coli 中甲基化酶引导的 修复错配系统. 修复过程：识别、切除和修补。 参与修复蛋白至少12种。 ① Mut S二聚体识别并结合错配部位，Mut L二聚体与Mut S组成复合物，沿双链向两个方向移动到GATC，并使DNA形成突环。 ② Mut H内切酶结合Mut SL，在未甲基化链GATC位点5’端切开【如切开处位于错配碱基3’侧，由外切酶I沿3’→5’切除；如切开处位于5’侧，由外切酶Ⅶ沿5’→3’切除】 为校正一个错配碱基，不仅需要找错配碱基本身，还需从远在1kb外找未甲基化GATC，切除长达1000nt以上链。解螺旋酶Ⅱ和SSB协助解链。 ③ 新DNA链由DNA聚合酶Ⅲ合成 ④ DNA连接酶连接修复产物。 人类细胞错配修复系统缺失将导致严重后果，最典型的例子是引发遗传性非息肉结肠癌 (HNPCC)，在美国大约每200个人中就有1人患之，占所有结肠癌的15%。 分析患病机理发现是由于微卫星序列不稳定所致，大约长度为1~4bp的串联重复序列（即DNA微卫星序列）在患者一生中会改变其大小(重复数目而非序列的长短)，且存在个体差异。 * 错配修复系统与微卫星序列不稳定之间的关系主要是在DNA复制中，因DNApol的“打滑”而引起短重复序列插入过多或过少，致使产生凸环，错配修复系统能识别并修复“打滑”造成的错误。但当系统出现问题时，凸环不能被校正。因此由细胞分裂而进行的DNA复制将导致许多基因发生突变。这种遗传不稳定性会引发癌症，尤其是控制细胞分裂的基因(癌基因和肿瘤抑制基因)发生突变。 * 错配修复系统:系统有区分亲链和子链的识别标签，即甲基化酶可使DNA的5′-GATC-3′中腺嘌呤N6甲基化。当亲链甲基化的GATC被复制，新合成子链的GATC序列将延时甲基化，短时内子代DNA双链处于半甲基化状态。利用这个时间差，错配修复只对未甲基化子链进行修复。 参与修复的蛋白质至少有12种。 * 切除修复 【较普遍】 概念：主要修复单个碱基缺陷（或短片段）的损伤。指在一系列酶作用下，将受损伤部位切除，以相应未损伤的另一链作模板，合成新链填补切去的部分，之后再将其连接的过程，是维持DNA稳定的重要修复方式。 修复过程涉及一系列酶促作用，有核酸内切酶、外切酶、聚合酶、连接酶。 步骤归纳为“切一补一封”。 切除修复(excision repair) 分为两种： 1）碱基切除修复(base-excision repair) 研究证明在所有细胞中都带有不同类型、能识别受损 核酸位点的糖苷水解酶，它能特异性切除受损核苷酸上 的N-β-糖苷键，在DNA链上形成去嘌呤或去嘧啶位 点，统称AP位点。 一类DNA糖苷水解酶只对应于某一特定类型的损伤， DNA分子中一旦产生了AP位点，AP核酸内切酶就会把受损核苷酸的糖苷-磷酸键切开，并移去包括AP位点核苷酸在内的小片段DNA,由DNA聚合酶Ⅰ合成新片段，最终由连接酶连成新的被修复的链。 * * 碱基切除修复有3步： ①特异酶识别损伤部 位，水解苷键（连接