马铃薯Y病毒广东分离物HC-Pro基因的克隆和序列分析.docVIP

马铃薯Y病毒广东分离物HC-Pro基因的克隆和序列分析 　　摘要：利用ＲＴ－ＰＣＲ法对广东烟草样品的马铃薯Ｙ病毒辅助成分蛋白质基因进行了克隆，并对其进行了序列分析。测序结果表明广东ＰＶＹ ＨＣ－Ｐｒｏ基因全长１ ３９５ ｂｐ，编码４６５个氨基酸。与已报道的ＰＶＹ ＨＣ－Ｐｒｏ基因核苷酸序列相比发现，ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ与ＰＶＹ ＮＴＮ株系的ＰＶＹ ＨＣ－Ｐｒｏ基因核苷酸序列相似性最高，达９９．６％。而氨基酸序列比较表明，ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ与ＰＶＹ Ｎ株系的ＰＶＹ ＨＣ－Ｐｒｏ氨基酸序列相似性最高，为９９．１％。进一步将ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ的核苷酸和其编码的氨基酸序列与其他报道的同源基因比对构建了系统关系树，结果显示广东烟草样品中ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ与ＰＶＹＮＴＮ ＰＶＹ ＨＣ－Ｐｒｏ亲缘关系最近。 　　关键词：马铃薯Ｙ病毒；广东烟草样品；ＨＣ－Ｐｒｏ基因；克隆；序列分析 　　中图分类号：Ｓ５３２；Ｓ４３２．４＋１ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８11420－4298-04 　　 　　Cloning and Sequence Analysis of HC-Pro of PVY-GD Isolate 　　 　　ＧＵＯ Ｘｉａｏ－ｊｉａｎ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｈｅｌｐｅｒ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｂｙ ＲＴ－ＰＣＲ ｆｒｏｍ ｔｏｂａｃｃｏ ｌｅａｖｅｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ ｉｎ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ， ａｎｄ ｔｈｅｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ． Ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ＨＣ－Ｐｒｏ ｏｆ ＰＶＹ ｆｒｏｍ ｔｏｂａｃｃｏ ｉｎ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ｗａｓ １ ３９５ ｂｐ， ｅｎｃｏｄｉｎｇ ４６５ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ． Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ ｓｈａｒｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ ｓｔｒａｉｎ ＮＴＮ ， ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ ｓｔｒａｉｎ Ｎ ． Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ ａｎｄ １７ ｏｔｈｅｒ ＰＶＹ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ＰＶＹ－ＨＣ－ＧＤ ｈａｄ ｔｈｅ ｃｌｏｓｅｓｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ Ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ ｓｔｒａｉｎ ＮＴＮ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｐｏｔａｔｏ ｖｉｒｕｓ Ｙ； tobacco leaves in Guangdong； ＨＣ－Ｐｒｏ ｇｅｎｅ； ｃｌｏｎｅ； ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ 　　 　　马铃薯Ｙ病毒是植物病毒最大属马铃薯Ｙ病毒属的典型成员。Ｐｏｔｙｖｉｒｕｓ成员还与其他病毒间有协生作用，它通常作为激发病毒促进另一种异源病毒的复制，而其复制水平不变或稍有降低，如ＰＶＹ就和马铃薯Ｘ病毒之间存在协生作用，研究发现ＰＶＹ促进ＰＶＸ的侵染，使ＰＶＸ的危害加重，而ＰＶＸ对ＰＶＹ则无影响，即ＰＶＹ介导ＰＶＹ／ＰＶＸ的协生作用［１－４］，病毒间的协生作用加剧了农作物病毒病的危害，造成了巨大的经济损失。目前ＰＶＹ在全球范围内已成为马铃薯、烟草和辣椒等茄科作物病毒病的主要病源之一，并且在中国范围内烟草遭受ＰＶＹ危害呈逐年上升趋势。 　　根据ＰＶＹ的鉴别寄主反应、血清学反应和引起的症状类型将其分为多个株系，常见马铃薯Ｙ病毒Ｏ株系、马铃薯Ｙ病毒Ｎ株系和马铃薯Ｙ病毒Ｃ株系三种株系。另外又有两种株系，如马铃薯Ｙ病毒ＮＴＮ株系最早于20世纪80年代在匈牙利被发现［５］，其与ＰＶＹＮ具有血清学关系，在烟草上引起叶脉坏死［６，７］。马铃薯Ｙ病毒Ｎ：Ｏ株系在烟草上引起类似于ＰＶＹＮ的叶脉坏死症状，但血清学鉴定发现它与ＰＶＹＮ没有血清学关系，而与ＰＶＹＯ具有血清学关系［８，９］。 　　ＰＶＹ由单一的外壳蛋白和一条正链ＲＮＡ组成，整个病毒基因组只有一个阅读框，翻译产生一个巨大的多聚前体蛋白质，通过加工裂解成不同功能的成熟蛋白质，随着对ＰＶＹ分子生物学研究的深入，对不同蛋白质也有一定的了解，其中辅助成分蛋白是一种７５ｋＤ的多肽，为一种多功能的蛋白质［１０］。它的Ｎ端控制蚜虫传播和病毒的复制；Ｃ端是一种半胱氨酸类型的蛋白酶，具有蛋白酶活性，以顺式方式催化自身的断裂［１１］，中心区域