[医药]抗原抗体反应及应用.pdfVIP

抗原 体反应及应用 不论天然的还是人工合成的分子，只要能被机体的免疫系统识别的都可以诱导机体的免疫 应答，产生相应的抗体。大多数抗体和抗原本身是既有免疫原性(诱发产生特异抗体) ，又有 反应原性(与特异的抗体相结合) 。抗原与抗体的特异性反应 仅可以在体内进行，而且可以 在体外进行。一切利用血清学技术方法所进行的各种测试都是基于这一根本的特性。抗体反 应技术的应用之广泛已经远远超出了免疫学、医学、甚至生命科学的范围，成为 类微量， 灵敏，快速的检测分析方法。本章着重介绍抗体制备，抗体抗原反应原理及技术方法的应用。 第一节抗体的制备 环境中的大部分生物(包括病原生物)及其产物分子和一些化合物对哺乳动物的免疫 系统而言是外源抗原，这些抗原能通过侵染或其他的途径刺激免疫系统，产生以抗体为主的 体液免疫应答。同样用抗原人工免疫实验动物，可以获得含有特异性抗体的血清，称为抗血 清(antiserum) ，因血清中抗体是多个抗原决定簇刺激 同 B 细胞克隆而产生的抗体，所以称 多克隆抗体(polyclonal antibody) 。一个B 细胞克隆所分泌的抗体即为单克隆抗体。用免疫动 物的B 细胞与骨髓瘤细胞融合，在体外可以分离出许多单个B 细胞克隆，以此方法可制备单 克隆抗体(monoclonal antibody) 。随着分子生物学技术的发展，已经可以用抗体基因文库 (antibody combinatorial library)筛选制备单克隆抗体。应用基因工程技术，根据需要对抗体进 行改造，获得基因工程抗体(engineering antibody) ，以及催化性抗体(catalytic antibody 或 abozyme)等的全新的抗体。 一、抗血清的制备 1 免疫动物 (1)抗原：免疫动物是制备抗血清的第 步。免疫所用的抗原可用病毒、细菌或者其他 蛋白质抗原，如果使用半抗原如小分子激素等，必须与大分子载体连接，连接剂见表7 1。 抗原的用量视抗原种类及动物而异， 次注射小鼠可以少至几个微克，免、羊甚至更大的动 物每次注射的量就相应增加，从几百μg ／次至几mg ／次。 〔2)佐剂及乳化：佐剂可以帮助抗原在注射部位缓慢释放，以增加免疫刺激的效果。佐剂 有完全和 完全佐剂之分。完全佐剂加有灭活的分枝杆菌(如卡介苗)或棒状杆菌。福氏佐剂 可从试剂公司购买，也可用羊毛脂和石蜡油按1：2 4 混合自行制备。佐剂与抗原按1：1 的 比例混合乳化为均匀的乳液，放置后 会发生油水分离。 (3)免疫动物：常用于制备抗血清的动物打豚鼠、家免、小鼠、大鼠等，如果大量生 产可用动物羊、马等，动物接受免疫的乳液量小鼠为1 0 2 0 mL ，家兔为2 4mL 。抗原 免疫动物的途径取决于动物种类、抗原特性和是否使用佐剂。腹腔注射(i p) ，肌肉注射(i m) ， 1 生物秀-专心做生物 www . 皮内注射(i d )和皮下注射(s c ) 合于任何抗原，这些途径主要刺激局部淋巴结发生免 疫应答，初次免疫和免疫加强注射均可使用。静脉注射(i.v.)则只 合于可溶性抗原及分散的 单细胞悬液，且不能使用佐剂，其诱发的免疫应答主要发生在脾脏。此外，在单克隆抗体制 备时，亦可用脾脏直接注射或体外免疫方法，尤其对微量抗原比较实用。体外免疫方法也常 用于人源单克隆抗体的制备。体外免疫时将脾细胞或外周血淋巴细胞(包括B 细胞，T 细胞及 抗原递呈细胞) 与抗原一起作体外培养，然后再与骨髓瘤细胞融合。初次免疫后要经过 2 3 次以上的免疫加强以保证能形成较高水平的IgC 抗体。两次免疫注射之间的时间间隔，一般 3 4 周比较 合大部分动物，小动物可间隔10 14d，大动物则在2 月左右。在免疫加强最 后一次注射后的一周内采集抗血清，可获得高水平的抗体。