第二章植物组织与细胞培养技术（二四）幻灯片教材.ppt

第二章 植物组织与器官培养;第一节 基础知识 第二节 组织培养的一般过程 第三节 植物组织器官培养 第四节 细胞培养 第五节 植物原生质体培养;Callus (pl Calli) 愈伤组织: 由母体组织脱分化产生的一团不定型的疏松的薄壁细胞。没有明显的器官组织分化。但是细胞大小、形态、液泡化程度、细胞质含量、细胞壁的特性等与正常组织存在很大的差异。 Organ formation/genesis：愈伤组织分化形成根和芽的过程。 ;Embryoid(胚状体): 指在组织和细胞培养中，起源于非合子细胞，经过多次分裂产生的一种与胚相似的结构。 1. 是组织和细胞培养的产物，以区别自然界中无融合生殖（Apomixes）产生的胚；2. 起源于非合子细胞以区别于精卵结合而形成的合子胚（Zygotic embryo）；3.具有胚根胚芽和胚轴的完整结构并与外植体的维管组织无联系而区别于组织培养中的不定芽或不定根。 ;Artificial/Synthetic/Man-made/Somatic seed：将植物离体培养产生的胚状体（主要指体细胞胚）包裹在含有养分和具有保护功能的物质中形成的在适应条件下能够发芽出苗的颗粒体 ;优点： （1）难以保存的种质资源 （2）固定杂种优势 （3）可加入农药肥料及激素，人为控制植物 的生长发育和抗逆性 （4）是植物基因工程和细胞工程应用于生产 的桥梁。 ;人工种子存在的问题;茎尖分生组织培养再生植株;病毒检测;一个植物细胞向分生状态回复过程所能进行的程度，取决于它在自然部位上所处位置和生理状态。;第二类;第三类;根据细胞类型不同从强到弱: 营养生长中心形成层薄壁细胞厚壁细胞（木质化细胞）特化细胞（筛管、导管细胞） 根据细胞所处的组织不同从强到弱： 顶端分生组织居间分生组织侧生分生组织薄壁组织（基本组织）厚角组织辅导组织厚壁组织;外植体; 细胞脱分化 1、脱分化（Dedifferentiation）：也称去分化，指离体条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或不分化细胞的过程。;（1）损伤。切割损伤的刺激，促使细胞增殖。 （2）激素。 （3）弱光或黑暗条件有利于脱分化中的细胞分裂。 （4）细胞位置。外植体本身的各类细胞可能对培养条件的刺激有不同的敏感性。 （5）外植体的生理状态。不同生理年龄和不同季节都会有不同的培养反应。 （6）植物种类的差异。 一般双子叶植物比单子叶植物及裸子植物容易。;诱导期：是细胞准备分裂的时期。细胞大小不变，内部发生生理生化变化，迅速合成蛋白质和核酸。 分裂期：诱导期后，外植体外层细胞分裂，在组织受伤表面形成一层愈伤组织， 中间细胞常不分裂，形成小芯。细胞分裂快，结构疏松，缺少结构，浅而透明。 质地类型：松脆和致密两种。高浓度生长素，可使Callus变得松脆；高浓度细胞分裂素，则可使致密;黄瓜子房组织经脱分化形成胚性愈伤组织; 细胞再分化（redifferentiation） 1、概念 ：指离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株。 ;§1 实验室设计与设备§2 实验基本操作§3 培养基的成分及其配制§4 培养条件的选择;　实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。 利用一定的设备、器材和特殊的实验室结构设计，达到严格无菌的条件 按组织培养流程来设计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱; 基本的工艺流程： 容器具洗涤，物质准备→配置培养基并灭菌→外植体消毒与无菌操作接种→观察、记录、处理（脱分化、再分化、继代） →再生植株; 标准的组培实验室 洗涤室、准备室、无菌室、培养室等;灭菌设备：高压蒸气灭菌锅 用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。 工作原理：在密闭的蒸锅内，0．1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。;注意事项： ①对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间； ②高压灭菌前后的培养基，其pH值下降0.2-0.3单位。因此，调PH值时，可适当调高0.2－0.3个单位。;(2).接种设备： 无菌超净工作台用于培养材料的消毒及接种。 使用前，将超净工作台上面的排风和杀菌按钮开启，灭菌15min后，关闭杀菌按钮，打开照明按钮，即可在上面进行操作。;酒精灯;(3).培养设备 ①带日光灯的培养架，主要用于接种后材料的培养。;②恒温箱：又