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生物化学实验 崔竹梅 2009 实验室规则 １、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不得喧哗吵闹、迟到早退，更不得缺席。 ２、爱护仪器，试剂、药品、蒸馏水等应节约使用，不得浪费。如不慎损坏仪器，应及时报告老师，说明原因，经老师同意后，方可换领。并应按规定赔偿或处理。贵重、精密仪器，应先熟悉使用方法，在老师的指导下，严格按操作规程操作，发现故障，应立即报告老师，不得擅自处理。 实验室规则 ３、取用试剂时，应仔细辨明标签，以免取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好，放回原处。 ４、注意安全，用吸量管吸取试剂时应使用吸球，严禁用嘴吸取。对于有毒、腐蚀的试剂更应注意，应避免其直接接触人体及衣物。乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火源，以免发生意外。 ５、注意实验室卫生、整洁。实验用过的和棉花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均应放入指定容器，不得随意乱扔或丢进水槽。实验结束后清扫、整理实验室。关好水、电、门、窗，经老师 检查同意后，方可离开实验室。 实验须知 １、实验前应作好预习，认真阅读实验指导。明确学习目标，能简述实验内容及主要的操作步骤。 ２、实验过程中，应根据实验指导及老师的要求，认真操作，细心观察，如实记录。严禁捏造实验数据，提倡实事求是的科学态度，实验做错应要求重做，反对弄虚作假。 ３、实验结束后，要认真书写实验报告，及时交老师批阅。实验报告包括如下内容：①实验项目、②实验原理、③主要操作步骤、④实验结果、⑤分析与讨论等。 实验报告 实验报告包括如下内容： １、实验项目 ２、实验原理 ３、主要操作步骤 4、实验结果 5、分析与讨论等 实验目录 实验一 分光光度计的使用 实验二 考马斯亮蓝G-250比色测定蛋白质含量 实验三 3，5-二硝基水杨酸比色测定糖的含量 实验四 唾液淀粉酶活力的一些因素 实验五 淀粉酶的活力测定及专一性实验 实验六 2，6-二氯酚靛酚滴定法测定L-抗坏血酸的含量 实验七 薄层层析法分离可溶性糖(一)硅胶板的制作 实验八 薄层层析法分离可溶性糖(二)样品分离鉴定 实验九 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 (一)制槽 实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 (二)样品的检测 实验1 分光光度计的使用 一、实验目的 学习分光光度计的使用 二、实验原理 利用各种化学物质所具有的发射 吸收或散射光谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的技术，称为光谱分析技术。根据光谱谱系的特征不同，可把光谱分析技术分为发射光谱分析、吸收光谱分析和散射光谱分析三大类。 吸收光谱分析原理：当光线透过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过，因此光线射出溶液之后，部分光波减少。这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。 吸收光谱分析法的常用方法：标准曲线法。 三、操作步骤（一）722型分光光度计的使用（操作要点） ①通电预热约20分钟，打开比色皿暗厢盖。 ②选择波长。 ③清洗比色皿（拿粗糙面，一次拿一个……） ④测装试液：约2/3–4/5。 ⑤擦净比色皿外部；粗糙面无明“水”，光面无水迹，无指纹，无纸纤维。 ⑥调零测试操作及读数正确。 ⑦测完清洗比色皿，放回原处。 ⑧仪器恢复原样。 （二）样品测定 四、结果处理 1、求两个样品管A450的平均值A450 2、计算样品液中重铬酸钾的浓度C（单位用mg/mL） 其经验公式为：A450=0.198C-5.058×10-3 五、思考题 1、到分光光度室中进行比色测定应携带哪些器材？他们分别起什么作用？ 2、比色时，设一个“0”号管的意义是什么？ 实验2：蛋白质含量测定（考马斯亮蓝） 一、实验目的 1）通过本实验学习考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理。 2）了解分光光度计的结构、原理和在比色法中的应用。 二、实验原理 1、考马斯亮蓝G-250（Coomassiebrilliant blue G-250，CBG）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。由Bradford（1976）提出。 2、CBG有点像指示剂，会在不同的酸碱度下变色：在酸性下是茶色，在中性下为蓝色。当结合蛋白质后，因为蛋白质会为CBG提供一个较为中性的环境，因此会变成蓝色。游离状态考马斯亮蓝G-250的最大光吸收在465nm；CBG-蛋白质结合物最大光吸收在595nm。 3、在一定的蛋白质浓度范围内（10-1000ug/ml），CBG-蛋白质结合物的O.D595nm值与蛋白质含量成正比，故可用分光光度法进行蛋白质的定量测定。 三、实验步骤 1、制作标准曲线： 取7支试管，依次分别加入0.0；0.10；0.15；0.20；0.30；0.