生物学-复制.pptVIP

DNA是生物体遗传的主要物质基础，通过复制将遗传信息传给子代，在子代的生长发育过程中，通过DNA的转录传给RNA，然后翻译成执行各种生命功能的特异蛋白质，使后代表现出与亲代相似的遗传性状。 核酸的三联体密码（triplet code）是连接核酸和蛋白质的桥梁。 翻译，即蛋白质的生物合成，就是将核酸中由 4 种核苷酸序列编码的遗传信息，通过遗传密码破译的方式解读为蛋白质一级结构中20种氨基酸的排列顺序 。 一、DNA聚合酶 1956年，Arthur等首先从大肠杆菌提取液中发现DNA聚合酶 (DNA polymerase)，简称：DNA-pol DNA聚合反应是可逆的，但放出的焦磷酸可推动聚合反应完成。 只催化脱氧核苷酸加到已有核酸链的游离的3-OH上，而不能使两个脱氧核糖核苷酸发生聚合，因此需要引物链（primer strand）存在。 DNA聚合酶的反应特点： 以四种脱氧核糖核苷三磷酸作底物； 反应需要接受模板链的指导； 反应需要有引物3-OH存在； DNA新链的生长方向为5 3. 产物DNA的核苷酸顺序由模板决定。 E.coli DNA pol Ⅰ是最早发现的聚合酶； 分子球形，相对分子质量为103 000， 由一条含有一个锌原子的928个氨基酸的多肽链组成， 直径约6.5nm，为DNA直径的三倍左右， 每个大肠杆菌细菌内约有400个DNA聚合酶Ⅰ分子。 三、与解除DNA高级结构有关的酶及蛋白因子 天然DNA分子无论是线形的还是环状的，均处于紧缩的超螺旋状态。 DNA复制时，双螺旋的二级结构和超螺旋的三级结构均必须解除。 目前，仅知是一个需要多种酶和蛋白因子参与的复杂过程。 解螺旋酶相关基因成为dna A, B,……X, 相关的酶称为Dna A，B,……X。其中Dna B即解螺旋酶（rep蛋白） 当先参与解链的有Dna A, B, C。 A辨认复制起点， C辅助B使其在起点上结合打开双链。 rep蛋白结合在解开的单链上，沿3→5方向移动，指导前导链的合成。 （三）单链DNA结合蛋白 称为SSB， 其功能是稳定DNA解开的单链，阻止复性和保护单链部分不被核酸酶降解。 ——在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整 四、引物酶(primase) DNA聚合酶都不能从头进行DNA合成，都需要一个引物（primer），只能在引物的一端逐步加上脱氧核苷酸以延长DNA链。 作为DNA合成的引物有多种，多数情况下，以RNA作为引物，也有以DNA片段为引物等。 促进这些引物合成的酶称为引物酶。 如以RNA为引物时， 引物酶为RNA聚合酶（不同于合成细胞质RNA的RNA聚合酶） 它是依赖DNA的一种特殊的RNA聚合酶，在模板的复制起始部位催化互补碱基的聚合，形成短片段RNA引物，为DNA的聚合提供3-OH。 在DNA复制过程中，碱基间氢键破裂并使DNA双链解旋和分开，以两条链作为模板(template)，由依赖DNA的DNA聚合酶催化，以四种脱氧核苷三磷酸作为底物，按碱基互补配对的原则，在模板上合成新的互补链；以这样的方式形成两条子链。 子代DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。 这种复制方式称为半保留复制。 第四节 DNA半不连续复制 双链DNA复制时，以拆开的两条单链为模板的合成是齐头并进的。 但是，DNA分子的两条链反向平行，即一条链是5→3，另一条链是3→5； 而所有已知的DNA聚合酶的合成方向都是5→3， 所以，很难说明DNA的两条多核苷酸链是如何作为模板能够同时合成其互补链的。 日本人冈崎提出了DNA的不连续复制模型： 认为3‘→5’走向的DNA实际上是由许多5‘→3’ 方向合成的DNA片段连接起来的。 实验也说明DNA的合成是不连续的，即先合成一些DNA小片段，然后再通过DNA连接酶将小片段连接起来。 这些小片段被称为冈崎片段。 在病毒、细菌和真核细胞中，DNA的复制大致包括三个阶段：起始、延伸和终止。 其间的反应和参与作用的酶与辅助因子各有不同。 （一）辨认起点 DNA复制有固定的起点（origin, ori）。 大肠杆菌的复制起点称为ori C。 有2个区域在复制起始中起关键作用： 一处是含4个9bp的重复序列； 一处是含3个13bp的重复序列（富含AT） ? 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 ? 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 真核生物复制速度比原核生物慢， 基因组比原核生物大，然而真核生物染色体DNA上有许多复制起点，可分段进行复制。 在真核生物的DNA复制中，除真核生物DNA聚合酶参与合成外，另有两个蛋白质复合参与作用。 R